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核糖体提取试剂盒

简要描述:

核糖体提取试剂盒
核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构,主要由蛋白质(40%)和RNA(60%)构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类存在于细菌等原核生物中,另一类存在于真核细胞的细胞质中。

更新时间:2022-03-09型号:BA1804厂商性质:生产厂家浏览量:51

核糖体提取试剂盒

产品货号:BA1804

产品规格:50T/100T

产品简介:

核糖体是细胞内一种核糖核蛋白颗粒(ribonucleoprotein particle),主要由RNA和蛋白质构成,其惟一功能是按照mRNA的指令将氨基酸合成蛋白质多肽链,所以核糖体是细胞内蛋白质合成的分子机器。核糖体无膜结构,主要由蛋白质(40%)RNA(60%)构成.核糖体按沉降系数分为两类,一类存在于细菌等原核生物中,另一类存在于真核细胞的细胞质中。他们有的漂浮在细胞内,有的结集在一起。

核糖体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的核糖体的提取。

本试剂仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。

产品组成:

产品名称

50T

100T

试剂(A): 核糖体提取液A

50ml

100ml

试剂(B): 核糖体提取液B

25ml

50ml

试剂(C): 核糖体保存液

20ml

40ml

自备仪器和试剂耗材:
仪器:离心机、涡旋混匀器、Dounce匀浆器、移液器、冰箱、冰盒
耗材:离心管、吸头
试剂:PBS(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液phosphate buffer saline/Dμlbeccos PBS:约含8mM Na2HPO42mM KH2PO4137mM NaCl3mM KCl),也可用HBSS

使用方法:
使用注意事项:

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

3. 最好使用Dounce匀浆器匀浆,如果没有Dounce匀浆器,用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可。

细胞核糖体提取:

1. 1-2×107个细胞,在4℃500×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞;

2. 用冷PBS洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
【注】:在500g条件下离心5分钟。

3. 加入500μl-1ml冷的试剂A,置冰上10分钟。

4. Dounce匀浆器匀浆30-40下。

5. 将匀浆液在4℃1000g力条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。

6. 将上清在4℃20000g力条件下离心10分钟,弃沉淀,收集上清。

7. 将上清在4℃100000g力条件下离心60分钟。弃上清,收集沉淀。
【注】:如果条件允许,可将离心时间延长到24小时。

8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B,混匀。

9. 4℃100000g 力条件下离心60分钟。
【注】:如果条件允许,可将离心时间延长到24小时。

10. 弃上清,沉淀用核糖体保存液重悬。

11. 即得到核糖体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。

组织核糖体提取:

1. 50-100mg 鲜动物组织样本,用PBS洗涤干净。

2. 用剪刀尽可能剪碎,用冷PBS洗涤两次。
【注】:在500g条件下离心5分钟。

3. 加入500μl-1ml冷的试剂A,置冰上10分钟。

4. Dounce匀浆器充分匀浆30-40下,至无明显固体团块。然后在4℃1000g力条件下离心5分钟。

5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管。

6. 4℃20000g力条件下离心10分钟,弃沉淀,收集上清。

7. 将上清在4℃100000g力条件下离心60分钟。弃上清,收集沉淀。
【注】:如果条件允许,可将离心时间延长到24小时。

8. 在沉淀中加入400μl冷的试剂B,混匀。

9. 4℃100000g力条件下离心60分钟。
【注】:如果条件允许,可将离心时间延长到24小时。

10. 弃上清,沉淀用核糖体保存液重悬。

11. 即得到核糖体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。

保存条件2-8℃,12个月有效。



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