产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 试剂盒 > 生化试剂盒 > BA1016-100α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒

α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒

简要描述:

α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒
α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。

更新时间:2021-11-25型号:BA1016-100厂商性质:生产厂家浏览量:41

α-葡萄糖苷酶(α-GC)活性检测试剂盒(微量法)

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品货号:BA1016

 

产品规格:100/48

 

产品内容:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入12mL双蒸水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存。

标准品:液体×1支,5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。

 

产品说明:

α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖,不仅与细胞壁的松弛或加固有关,而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。

α-GC 分解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算α-GC 活性。

 

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),15000g4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。

2、组织的处理:称取约0.2g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;15000g4℃,离心20min,取上清,置冰上待测。

3、标准样品的准备:取100μL标准液,加入到400μL 试剂三中,得到1μmol/mL标准液,十倍稀释到100nmol/mL,用蒸馏水倍比稀释:502512.56.250 nmol/mL100502512.56.250 nmol/mL做标准液。

二、测定步骤和加样表:

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。

2. 加样表

试剂名称(µL

测定管

对照管

标准管

试剂一

100



蒸馏水

150

150


试剂二

30

30


 

 

 

 

 

充分混匀,放入37℃准确水浴30min后,立即放入沸水浴中煮沸5min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂一


100


充分混匀,8000g4℃,离心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

充分混匀,8000g4℃,离心5min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)

上清液

70

70


标准液



70

试剂三

130

130

130

充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。

三、α-GC 活力计算:

1、标准曲线建立:根据标准管的浓度(y)和吸光度(x,各标准管减去浓度为0的标准管为标准管A),建立标准曲线。

2、根据标准曲线,将ΔAx)带入公式计算样品产物浓度(nmol/mL)。

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在每mL体系中每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

GC 活力(U/mg prot)=(y×V反总)÷(V×Cpr)÷T=18.67×y÷Cpr

需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在每mL体系中每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

GC 活力(U/g鲜重) = (y×V反总)÷(W×V÷V样总)÷T=18.67×y÷W

3)按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在每mL体系中每小时产生1nmol-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

GC 活力(U/104 cell)=(y×V反总)÷(1000×V÷V样总)÷T=0.0187×y

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLV反总:反应体系总体积,0.28mLV样:加入反应体系中样本体积,0.03mLV样总:加入提取液体积,1mLW:样品质量,g1000:细胞或细菌总数,1000万;T:反应时间,0.5h

 

 


留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
在线咨询
电话咨询
在线客服