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5'-核苷酸检测试剂盒过碘氧化法

简要描述:

5'-核苷酸检测试剂盒过碘氧化法
核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命的基本物质之一,广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,根据化学组成不同,核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。

更新时间:2021-11-25型号:BA1547-50厂商性质:生产厂家浏览量:100

5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)

产品货号:BA1547

 

产品规格:50T

 

产品简介:

核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命的基本物质之一,广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,根据化学组成不同,核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)

5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)检测原理是无机磷与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵,随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子,进而形成蓝色的钼蓝,在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比,在660nm处检测吸光度,通过检查标准曲线,获得磷含量。同时为了消除其他无机磷的干扰,测定未经过碘酸氧化的无机磷,予以扣除,即为准确的5´-核苷酸磷。该试剂盒的特点是专一测定5´-核苷酸。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

产品组成

50T

保存条件

试剂(A):磷标准(1mg/ml

1ml

4

试剂(B):样品处理液

10ml

4℃,避光

试剂(C):玻璃珠

50

室温,避光

试剂(D):H2O2

2×1ml

室温,避光

临用前,按E1E2E3=311配制定磷试剂,即配即用。

试剂(F):过碘酸试剂

3ml

4℃,避光

试剂(G):NA assay buffer

15ml

室温,避光

 

操作步骤(仅供参考)

1.        稀释标准品:取磷标准(1mg/ml),按磷标准(1mg/ml):蒸馏水=199的比例稀释标准品至10μg/ml。取干净离心管或试管,按下表进行标准品浓度的依次稀释,获得不同浓度的多个磷标准。


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

磷标准(10μg/ml/ml

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1.0

蒸馏水/ml

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0

磷含量/(μg/ml

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

2.        制备待测样液:取用粗AMP水解液或RNA水解液,作为待测样液。

3.        磷测定:按下表进行操作,依次加入下列溶液,不能颠倒,每加一种试剂,必须充分混匀。如果样品中有无机磷,应同时检测无机磷,并将无机磷扣除。


空白管

标准管

氧化管

未氧化管

蒸馏水

1.0

-

0.5

0.5

系列磷标准(0-10号)/ml

-

0.5

-

-

待测样液/ml

-

-

0.5

0.5

过碘酸试剂/ml

0.05

0.05

0.05

0.05

NA assay buffer/ml

0.2

0.2

0.2

0.2

混匀,45℃孵育10min

NA 显色液/ml

0.25

0.25

0.25

0.25

混匀,孵育

定磷试剂/ml

1.5

1.5

1.5

1.5

 

4.        孵育,以空白管调零,比色杯光径1.0cm,分光光度计测定660nm处吸光度(即为A660),分别为A氧化A未氧化

 

计算:

  以磷含量(μg/ml)为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得标准曲线。氧化管为样液中所有磷的含量,未氧化管为样液未氧化前无机磷的含量,二者只差即为样液中-核苷酸磷含量。

按下列公式计算样液中5´-核苷酸的含量:
5´-
核苷酸含量(mg/ml=CM/31)×(N/1000

 

注意事项:

1.        上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

2.        待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。

3.        如果样品浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

 

有效期:6个月有效。

 


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