产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 试剂盒 > 生化试剂盒 > BA1090-100二胺氧化酶活性检测试剂盒 (微量法)

二胺氧化酶活性检测试剂盒 (微量法)

简要描述:

二胺氧化酶活性检测试剂盒 (微量法)
DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

更新时间:2021-11-24型号:BA1090-100厂商性质:生产厂家浏览量:20

二胺氧化酶活性检测试剂盒 (微量法)

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

 

产品货号:BA1090

 

产品规格:100/48

 

产品简介:

DAO(EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。

DAO催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在500nm处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算DAO活性。

 

产品内容:

提取液:液体70mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体0.25mL×1支,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,使用时加2mL水溶解,4℃可保存1个月。

试剂三:液体1mL×1支,4℃保存。

 

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、96孔板/玻璃比色皿、蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃离心20min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体:直接测定。

二、测定操作表:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

2、操作表

试剂名称(μL

对照管

测定管

粗酶液

50

50

提取液

128

108

试剂一

2

2

试剂二

20

20

试剂三


20

混匀,37℃水浴30min,测定500nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。

 

 

三、酶活性计算公式:

a. 使用96孔板测定的计算公式如下

1、动物组织DAO活力的计算

1)按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/mg prot=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=30×ΔA÷cpr

2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/g 鲜重)=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=30×ΔA÷W

2、血清(浆)DAO活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/L=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=30×ΔA

3、按细胞数量计算:

单位的定义:每104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO活性(U/104cell=ΔA÷d÷ε×V反总÷500×V÷V提取)÷T= 0.06×ΔA

V反总:反应总体积,0.2 mLV样本:加入粗酶液体积,0.05mLV提取,加入提取液体积,1mLcpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本鲜重,gd:光径,0.6cmε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cmT:反应时间,30min

b. 使用比色皿测定的计算公式如下

1、动物组织DAO活力的计算

1)按蛋白浓度计算

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/mg prot=ΔA÷d÷ε×V反总÷(cpr×V样本)÷T=18×ΔA÷cpr

2)按样本鲜重计算

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/g 鲜重)=ΔA÷d÷ε×V反总÷(W÷V提取×V样本)÷T=18×ΔA÷W

2、血清(浆)DAO活力的计算

单位的定义:每mL血清(浆)在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAOU/L=ΔA÷d÷ε×V反总÷V样本÷T=18×ΔA

3、按细胞数量计算:

单位的定义:每104个细胞在反应体系中每分钟催化产生1μmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

DAO 活性(U/104cell=ΔA÷d÷ε×V反总÷500×V÷V提取)÷T= 0.036×ΔA

V反总:反应总体积,0.2 mLV样本:加入粗酶液体积,0.05mLV提取,加入提取液体积,1mLcpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本鲜重,gd:光径,1cmε:氧化型邻联茴香胺消光系数,7.5×10-3mL/μmol/cmT:反应时间,30min

 

注意事项:

1、如果OD值小于0.01,适当加大提取用样本质量;OD值大于0.8,粗酶液可适当稀释,或者减少提取用样品质量。

2、样品蛋白质含量需要另外测定。

 

 

 


留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
在线咨询
电话咨询
在线客服