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过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒

简要描述:

过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒
过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化产生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。

更新时间:2021-11-23型号:BA1543-50厂商性质:生产厂家浏览量:97

过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒(硫酸钛比色法)

产品货号:BA1543

 

产品规格:50T

 

产品简介:

过氧化氢(H2O2)是生物体内最常见的活性氧分子,主要由SODXOD等催化产生,由CATPOD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互转化的枢纽。生命体内积累的H2O2是由一些氧化物催化超氧阴离子发生氧化还原反应而形成,H2O2相对超氧阴离子性质稳定,但其存在可以直接或间接导致细胞膜脂质过氧化损害,加速细胞的衰老和解体,H2O2也是许多氧化应激反应中的关键调节因子。

过氧化氢(H2O2)检测试剂盒(硫酸钛比色法)其检测原理是H2O2与硫酸钛反应生成的过氧化物-钛复合物黄色沉淀,溶解于强酸中,其黄色深浅与过氧化氢浓度在一定范围内呈线性关系,可通过比色法检测 412nm 处吸光度。该试剂盒主要用于检测植物组织、血清、血浆等样品中过氧化氢(H2O2)含量。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

 

产品组成:

产品组成

50T

保存温度

试剂(A):   H2O2基液

1ml

室温

试剂(B):   碱性基液

10.5ml

室温

试剂(C):   硫酸钛

1g

室温

试剂(D):   酸性基液

100ml

室温

 

自备材料:

1.        蒸馏水、丙酮

2.        匀浆器或研钵

3.        低温离心机

4.        分光光度计、比色杯

 

操作步骤:(仅供参考)

1.  准备样品:

植物样品:取正常或逆境下的新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取5g,加入5ml预冷的丙酮,在冰浴条件下迅速匀浆或研磨,4℃ 12000g离心20min,收集上清液,测量提取液总体积,4℃保存备用。

血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,4℃保存,用于过氧化氢的检测。

高活性样品:如果样品中含有较高浓度的过氧化氢,可以使用丙酮进行恰当的稀释。

2.  配制10mM H2O2标准溶液:由于过氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢

的实际浓度。本试剂盒提供的H2O2基液的H2O2浓度约为1M,用蒸馏水稀释100,使H2O2浓度约为10mM。蒸馏水调零,分光光度计测定A240,根据公式H2O2浓度(mM)=22.94×A240计算出H2O2基液中H2O2的实际浓度,再用丙酮稀释H2O2基液配制10mM H2O2-丙酮标准溶液。(一般情况下,新配制的10mM H2O2基液A240 0.4~0.453个月以后A2400.35~0.42)

按下表依次稀释(常用浓度0.3-3mM,1~5)

 

加入物(ml)

1

2

3

4

5

6

7

丙酮-H2O2标准(10mM )

0.03

0.05

0.08

0.1

0.3

0.5

0.8

预冷丙酮

0.97

0.95

0.92

0.9

0.7

0.5

0.2

H2O2浓度( mM )

0.3

0.5

0.8

1

3

5

8

3.  配制硫酸钛溶液:0.3g硫酸钛加入6ml蒸馏水中,即为5%硫酸钛溶液,4℃保存。

4.  H2O2加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的H2O2浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置平行管。

加入物(ml)

空白管

标准管

测定管

预冷丙酮

1

-

-

系列丙酮-H2O2标准(1~7)

-

1

-

待测样品

-

-

1

碱性基液(直接加入到溶液)

0.2

0.2

0.2

硫酸钛溶液 (直接加入到溶液)

0.1

0.1

0.1

加入碱性基液、硫酸钛溶液时,应直接加至溶液中,不要粘到管壁。

5.  H2O2测定:混匀,室温放置5min12000g离心15min,弃上清液,留取沉淀,如有必要可加入预冷丙酮反复洗涤沉淀物。向各管的沉淀中加入2ml酸性基液,摇动,使沉淀完全溶解。比色杯光径1cm,空白管调零,分光光度计测定412nm处各标准管、测定管的吸光度,如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测。

计算:以系列丙酮-H2O2标准(0.30.50.81358 mM)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程。以测定管吸光度代入回归方程求得待测样品中H2O2的浓度。

组织样品H2O2 (mmol/g)=(C0×VT×N)/m

液体样品H2O2 (mmol/L)=C0×N

式中:C0=根据待测样品的吸光度在标准曲线求得H2O2浓度(mM)

VT=待测样品的总体积(L)

m=样品质量(g)

N=样本稀释倍数

 

注意事项:

1.        本试剂盒亦可用酶标仪进行检测,但检测的样本数相应增加。

2.        加入碱性基液、硫酸钛溶液时,应直接加入至溶液中,不要粘到管壁。

3.        过氧化物-钛复合物黄色沉淀溶解于酸性基液时需要一段时间,需完全溶解,否则有可能影响测定结果。

4.        H2O2基液和碱性基液应严格密闭保存,避免挥发,否则效率会下降。

5.        H2O2基液和酸性基液有一定腐蚀性,请小心操作。

6.        硫酸钛溶解于水后应尽早使用,如暂时不用,可短期放置4℃冰箱保存。亦可用分析天平称取一定量的粉剂,配置5%的浓度即可。

7.        为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期:12个月有效。4℃运输。

 

 

 

 

 

 


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