产品中心您现在的位置:首页 > 产品展示 > 试剂盒 > 生化试剂盒 > BA1107-50过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒

过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒

简要描述:

过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。

H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。

更新时间:2021-11-23型号:BA1107-50厂商性质:生产厂家浏览量:86

过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒(紫外分光光度法)

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

 

产品货号:BA1107

 

产品规格:50/48

 

产品简介:

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。

H2O2240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。

 

产品内容:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;

试剂二:液体100μL×3瓶,4℃保存。

 

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1、细菌、细胞或组织样品的制备

细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(功率20%200w,超声3秒,间隔10秒。重复30次);8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为15-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10分钟,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

二、CAT测定步骤:

1 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm处,蒸馏水调零。

2CAT检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二中加入20mL试剂一,充分混匀,作为工作液;用不完的试剂4℃保存一周。

3、测定前将CAT检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min

4、取1mLCAT检测工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL样本,混匀5s;室温下立即测定240nm下的初始吸光值A11min后的吸光值A2。计算ΔA=A1-A2

三、CAT活性计算:

1、血清(浆)CAT活力的计算:

单位的定义:每毫升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/mL)= [ΔA×V反总÷ε×d×109]÷V÷T=678×ΔA

2、组织、细菌或细胞中CAT活力计算:

1)按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷ε×d×109V×Cpr÷T=678×ΔA÷Cpr

2)按样本鲜重计算:

单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷ε×d×109W×V÷V样总)÷T=678×ΔA÷W

3 按细菌或细胞数量计算:

单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2降解定义为一个酶活力单位。

CAT(U/104 cell)[ΔA×V反总÷ε×d×109500×V÷V样总)÷T=1.356×ΔA

V反总:反应体系总体积,1.035×10-3Lε: H2O2摩尔吸光系数,4.36×104L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.035mlV样总:加入提取液体积,1mlT:反应时间,1minW,样本质量,gCpr:上清液蛋白浓度,mg/ml500:细胞或细菌总数,500万。

 


留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
在线咨询
电话咨询
在线客服