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葡萄糖脱氢酶(GCDH)检测试剂盒

简要描述:

GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶,同时也是临床血糖测定的诊断用酶,可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH在340 nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

更新时间:2021-11-22型号:BA1248-50厂商性质:生产厂家浏览量:48

葡萄糖脱氢酶(GCDH)活性检测试剂盒(紫外分光光度法)

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

 

产品货号:BA1248

 

产品规格:50/48

                                        

产品简介:

GCDHEC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶,同时也是临床血糖测定的诊断用酶,可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,利用NADH340 nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

 

产品内容:

提取液:液体60 mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体50 mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加入15mL试剂一溶解,用不完的试剂4℃保存。

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃避光保存。临用前每瓶加入5mL试剂一溶解,用不完的试剂建议分装后-20℃避光保存,避免反复冻融。

 

需自备的仪器和用品:

紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1 mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

组织:按照组织质量(g)︰提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1 g组织,加入1 mL提取液)进行冰浴匀浆,然后,8000 g4℃,离心10 min,取上清置于冰上待测。

细胞或细菌:先收集细胞或细菌到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个)︰提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞或细菌(功率20%200 W,超声3s,间隔7s,总时间5min);然后8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

血浆(清):直接检测。

二、测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340 nm,蒸馏水调零。

2、工作液的配制:按照试剂一︰试剂二︰试剂三为432的体积比例充分混匀,备用,用前37℃预热10 min

3 操作表:在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂:

试剂名称(μL

空白管

测定管

工作液

900

900

样本


100

蒸馏水

100


加入样本即开始计时,立即混匀,于340nm处测定10s时的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或培养箱1min,拿出迅速擦干测定1min 10s 时的吸光值A2,计算ΔA测定管=A2测定-A1测定,ΔA空白管=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管。空白管只需做1-2次。

三、GCDH 酶活计算:

1)按蛋白浓度计算

酶活定义:每毫克蛋白每分钟产生1nmol NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反总÷V×Cpr÷T=1607.7×ΔA÷Cpr

2)按样本质量计算

酶活定义:每克样品每分钟产生1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活(U/g 鲜重)=ΔA÷ε×d×109×V反总÷V×W÷V样总)÷T =1607.7×ΔA÷W

3)按细菌和细胞数量计算

酶活定义:每104个细胞每分钟产生1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活(U/104cell=ΔA÷ε×d×109×V反总÷V÷V样总×细胞数量(万个))÷T

=1607.7×ΔA÷细胞数量(万个)

4)按液体体积计算

酶活定义:每mL样本每分钟产生1nmolNADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反总÷V÷T=1607.7×ΔA

εNADH 摩尔消光系数,6.22×103 L/ mol /cmd:比色皿光径,1cm109:单位换算系数, 1mol=109 nmolV反总:反应体系总体积,1×10-3 LV样:反应体系中样本体积,0.1mLV样总: 加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,gT:反应时间:1min

 

注意事项:

1、样本提取上清液置于冰上待测,且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、当A1A2大于1时,建议将样品用提取液稀释后再进行测定。

3、当ΔA大于1时,建议将样品用提取液稀释后再进行测定。

 

 

 


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