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漆酶活性检测试剂盒 (可见分光光度法)

简要描述:

漆酶活性检测试剂盒(可见分光光度法)
漆酶(CE1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一种环保型酶,其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基,在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS,测定ABTS自由基的增加速率,可计算得漆酶活性。

更新时间:2021-11-22型号:BA1256-50厂商性质:生产厂家浏览量:49

漆酶活性检测试剂盒(可见分光光度法)

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号:BA1256

 

产品规格:50/48

 

产品简介:

漆酶(CE1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,漆酶存在菇、菌及植物中,是一种环保型酶,其独特的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基,在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS,测定ABTS自由基的增加速率,可计算得漆酶活性。

 

产品内容:

提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×2瓶,4℃避光保存。

 

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水,水浴锅。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取:

1)组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2)细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。

3)培养液:直接检测。

二、测定步骤:

1 分光光度计预热30min以上,调节波长至420nm,蒸馏水调零。

2 水浴锅温度调至45℃。

3 工作液的配制:一瓶试剂二用25mL试剂一溶解。现用现配。

4 操作表:在1mL玻璃比色皿中分别加入下列试剂:

样本名称

测定管

空白管

样本(μL

150

-

蒸馏水(μL

-

150

工作液(μL

850

850

1mL玻璃比色皿中分别加入上述试剂,充分混匀后于420nm处测定10s时的吸光值A1,迅速置于45℃水浴3min,拿出迅速擦干测定190s时的吸光值A2,计算△A测定管= A2测定-A1测定,△A空白管=A2空白-A1空白,△A=A测定管-A空白管。空白管只需做一次。

三、漆酶活计算:

1)按蛋白浓度计算

酶活定义:每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活(U/mg prot=△A÷ε÷d×V反总×109÷V×Cpr÷T= 61.7×△A÷Cpr

2)按样本质量计算

酶活定义:每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活(U/g 鲜重)=△A÷ε÷d×V反总×109÷V×W÷V样总)÷T= 61.7×△A÷W

3)按细胞数量计算

酶活定义:每104个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活(U/104 cell=△A÷ε÷d×V反总×109÷V×500÷V样总)÷T= 0.123×△A

4)按液体体积计算

酶活定义:每mL液体每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活(U/mL=△A÷ε÷d×V反总×109÷V÷T= 61.7×△A

εABTS 摩尔消光系数:36000L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应总体积,0.001LV样:反应中样本体积,0.15mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mL,蛋白浓度需自行测定;W,样本质量,gT:反应时间,3min

 

注意事项:

1、工作液需临用前配制,并且尽快使用,4℃保存一周,若变色则不能使用。

2、测定之前进行预实验,若吸光值较高,请将样品用提取液进行适当的稀释再测定,并在计算公式中乘以稀释倍数。

3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔,正常情况下,OD值变化不超过0.05

 


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