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酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒

简要描述:

酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,酸性木聚糖酶(ACX)一般分离自耐酸的真菌,细菌及部分霉菌。

更新时间:2021-11-19型号:BA1279-100厂商性质:生产厂家浏览量:27

酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒(微量法)

注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号:BA1279

 

产品规格:100/48

 

产品简介:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应用于酿造和饲料工业中,酸性木聚糖酶(ACX)一般分离自耐酸的真菌,细菌及部分霉菌。

ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在540nm处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比,通过测定反应液在540nm吸光值增加速率,可计算ACX活力。

 

产品内容:

缓冲液:液体60mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体7mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体4mL×1瓶,4℃保存。

标准品:粉剂×1支,4℃保存。10mg木糖,临用前加入667µL蒸馏水溶解,得到100µmol/mL木糖溶液,蒸馏水稀释50倍得到2µmol/mL木糖标准溶液。

 

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、粗酶液提取

1、发酵液:发酵液于8000rpm4℃,离心15min,取上清,作为待测样品。

2、酶干粉:称约1mg,加1mL缓冲液溶解,蒸馏水稀释10倍待测。

3、组织样品:称约0.1g组织,加入1mL缓冲液,冰上充分研磨。8000rpm4℃,离心15min,取上清蒸馏水稀释 10倍待测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管中加入下列试剂)

试剂名称(μL

对照管

测定管

空白管

标准管

样品

60

60



2µmol/mL木糖标准品




60

蒸馏水



60


缓冲液

90

90

90

90

试剂一


60

60

60

混匀,50℃水浴中反应30min,立即沸水浴中10min灭活。(注意不要让盖子爆开,以免进水,改变了反应体系)

试剂一

60




试剂二

90

90

90

90

试剂三

30

30

30

30

混匀,沸水浴中显色5min(注意不要让盖子爆开,以免进水改变了反应体系),冷却后吸取200µL96孔板或比色皿中,尽快测定各管540nm下的吸光度,分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。

三、ACX 活性计算:

1、发酵液ACX活力计算:

酶活定义:50℃,pH4.8条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX活力(U/mL=C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷T

=0.067×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)

C标准:木糖标准溶液浓度,2µmoL/mLT:反应时间,30min

2、酶干粉ACX活力计算:

酶活定义:50℃,pH4.8条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(U/mg= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W1÷T

=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W1

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2µmoL/mLV提取:加入缓冲液体积,1mLW1:酶干粉重量,mgT:反应时间,30min

3、组织中ACX活力计算:

1)按样品蛋白浓度计算:

酶活定义:50℃,pH 4.8条件下,每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(U/mg prot= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V样品÷(V样品×Cpr)÷T

=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷Cpr

2)按样品鲜重计算:

酶活定义:50℃,pH4.8条件下,每克组织每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力(U/g 鲜重)= 10×C标准×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)×V提取÷W2÷T

=0.67×(A测定-A对照)÷(A标准-A空白)÷W2

10:样本稀释倍数,10倍;C标准:木糖标准溶液浓度,2µmoL/mLV提取:加入缓冲液体积,1mLW2:样本鲜重,gT:反应时间,30minCpr:样品蛋白浓度,mg/mLV样品:加入的样品体积,0.06mL

 

注意事项:

吸光度变化应该控制在0.01~1.5之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

 

 

 


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