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细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)

简要描述:

尚宝细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的自噬染色,又称为MDC染色液,可与EB合用双染。

更新时间:2021-11-25型号:厂商性质:生产厂家浏览量:43

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC)

产品货号:R23340

产品规格:100T

产品简介:

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞食物在溶酶体内降解的过程,自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构,内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物,损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程,可靶向长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体途径进行降解。自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的,包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素,是嗜酸性染色剂,通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂,其检测激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm。尚宝细胞自噬染色检测试剂盒(MDC)适用于培养细胞的自噬染色,又称为MDC染色液,可与EB合用双染。

 

产品组成:

产品名称

100T

保存条件

试剂(A): MDC Stain(500×)

30μL

-20℃,避光

试剂(B): Stain buffer

50ml

4℃

试剂(C): Wash buffer

250ml

4℃

 

自备材料:

1. 低速离心机

2. 1.5ml离心管

3. 载玻片、盖玻片

4. 荧光显微镜

 

操作步骤(仅供参考)

()玻片法

1. 收集细胞,用300500μ lWash buffer清洗细胞1次,8001000g离心5min,弃上清。

2. 加入适量的Stain buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至10 6 /ml

3. 5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer,混匀,即为MDC Stain(10×)

4. 90μ l细胞悬液至新的1.5ml离心管中,加入10μ lMDC Stain(10×),轻轻混匀。

5. 37℃或室温避光染色1545min

6. 8001000g离心5min,弃上清,收集细胞,用300500μ lWash buffer清洗细胞2次,8001000g离心5min,弃上清。

7. 加入100μ lWash buffer重悬细胞,滴加于载玻片上并加盖玻片。

8. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm),计数并拍照。

()96孔板法

1. 配制MDC染色工作液:按MDC Stain(500×)Stain buffer=1499的比例混合,即为MDC染色工作液。如不能及时用完,应-20℃避光保存。

2. 轻轻吸除96孔板中的培养液,加入100μ l MDC染色工作液至各孔,37℃ 5%CO2避光孵育1560min

3. 各孔加入100μ l Wash buffer清洗23次。

4. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm,阻断滤光片波长512nm),计数并拍照。

()MDCEB双染法

1. 收集细胞,用300500μ lWash buffer清洗细胞1次,8001000g离心5min,弃上清。

2. 加入适量的Stain buffer重悬细胞,计数并调节细胞浓度至 10 6 /ml

3. 5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer,混匀,即为MDC Stain(10×)

4. 90μ l细胞悬液至新的1.5ml离心管中,加入10μ lMDC Stain(10×)0.2uM EB染色液,轻轻混匀。

5. 滴加于在玻片上,室温避光染色1530min,加盖玻片。

6. 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm),计数并拍照。

 

染色结果:

正常细胞       细胞被均匀染成黄绿色荧光

凋亡细胞       染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一,致密浓染的绿色颗粒。

注意事项:

1. MDC StainEB对人体有一定害处,请小心操作。

2. AO常与EB染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

3. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

 

有效期:12个月有效。

 

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