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维生素C检测试剂盒(磷钼酸比色法)

简要描述:

维生素C检测试剂盒(磷钼酸比色法)检测原理是在强酸和偏磷酸的根离子存在条件下,钼酸铵能与维生素C反应蓝色化合物,在一定浓度范围(样品浓度控制在25~250μg/ml),吸光度值与浓度呈线性关系,以分光光度计760nm处检测吸光度,获得Vita minC含量。

更新时间:2021-10-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:65

维生素C检测试剂盒(磷钼酸比色法)

产品货号:R23240

产品规格:50T/100T

产品说明:

   维生素C(Vita minC)又称L-抗坏血酸,是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素,在生物体内维生素C是一种抗氧化剂,为酸性己糖衍生物,是稀醇式己糖酸内酯,保护身体免于自由基的威胁,同时也是一种辅酶,其广泛的食物来源为各类新鲜蔬果。Vc有L-型和D-型两种异构体,只有L-型的才具有生理功能,还原型和氧化型都有生理活性。

维生素C检测试剂盒(磷钼酸比色法)检测原理是在强酸和偏磷酸的根离子存在条件下,钼酸铵能与维生素C反应蓝色化合物,在一定浓度范围(样品浓度控制在25~250μg/ml),吸光度值与浓度呈线性关系,以分光光度计760nm处检测吸光度,获得Vita minC含量。该试剂盒主要用于植物组织中的维生素C(抗坏血酸)的检测,其优点是:1、反应迅速;2、操作简便;3、还原糖及其他常见的还原物质对实验没有干扰,因此专一性好。

本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成

试剂名称

50T

100T

保存条件

试剂(A): Vita min C标准(250μg/ml)

10ml

20ml

4℃,避光

试剂(B): 组织匀浆液(5×)

500ml

1000ml

室温

试剂(C): MPA

2×1.5g

2×3g

室温,避光

试剂(D): 酸性缓冲液

2×50ml

2×100ml

室温

试剂(E): Vita min C Assay buffer

100ml

200ml

4℃,避光

自备材料:

1、蒸馏水

2、离心管或试管

3、离心机

4、水浴锅或恒温箱

5、比色杯

6、分光光度计

操作步骤(仅供参考):

1、稀释组织匀浆液:按组织匀浆液(5×):蒸馏水=1:4的比例稀释,获得1×组织匀浆液。

2、准备样品:取待测材料如青菜、水果、松针等,清洗擦干,准确称量5g,加入研磨器内,再加入少量1×组织匀浆液,研磨碎,留取上清,再次用 1×组织匀浆液研磨,最后

一并倒入50ml离心管,补充1×组织匀浆液至45ml,充分混匀,4000g离心5min,取0.5 ml上清液,加入等量蒸馏水,即为待测液。

3、配制MPA工作液:取一支1.5gMPA粉末,充分溶解于50ml酸性缓冲液中,4℃保存3~4天有效。

4、配制系列Vita min C标准:取干净离心管或试管,按下表进行操作,依次稀释。

加入物(ml)

1

2

3

4

5

6

7

8

Vita min C标准(250μg/ml)

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.8

1.0

蒸馏水

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.2

0

相当于Vita min C含量(μg)

25

50

75

100

125

150

200

250

5、Vita min C加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的Vita min C含量过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定,样品的检测最好能设置2平行管,求平均值。

加入物(ml)

空白管

标准管

测定管

待测液

-

-

1

系列 Vita min C标准(1~8号)

-

1

-

蒸馏水

1

-

-

1×组织匀浆液

2

2

2

MPA工作液

1.5

1.5

1.5

Vita min C Assay buffer

2

2

2

 

6、Vita min C测定:立即混匀,30℃水浴15min,以空白调零,比色杯光径1cm,以分光光度计测定760nm处系列标准管、测定管的吸光度。

计算:以系列标准Vita min C (25、50、75、100、125、150、200、250μg)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,求得回归方程,以测定管的吸光度代入回归方程求得维生素C含量。

100g 样品中维生素C含量(mg)

 =( m0×V1) ×100/[(m1×V2)×1000]=( m0×V1) /[( m1×V2)×10]

式中:  m0 : 根据待测样品的吸光度值在标准曲线上查出的维生素C的质量(μg)

V1 : 待测液的总体积( ml)

m1 : 样品质量(g)

V2 : 测定时取样体积( ml)

1000 : μg换算成mg

注意事项:

1、上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。

2、组织匀浆液(5×)久置或低温保存,容易产生乳白色浑浊;如果白色浑浊不明显,可以直接使用,不影响效果;如果白色浑浊较多,应弃用。

3、Vita min C Assay buffer 室温保存时间过长或者过期会出现白色粘稠物,即不可使用,应换新的产品使用。不使用时建议4℃保存。

4、待测样品如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。

5、如果样品浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

保存条件

    6个月有效。4℃运输,4℃保存。

附录1:标准曲线制作:尚宝在室温条件下按说明书操作,用分光光度计对系列标准进行吸光度的测定,其数值及标准曲线如下(仅供参考):

维生素C含量μg

25

75

100

125

200

250

吸光度

0.072

0.248

0.318

0.501

0.693

0.887

 

 


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