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组织细胞RNA提取试剂盒 核酸类

简要描述:

组织细胞RNA提取试剂盒 核酸类RNA的种类来源比较多,提取制备的方法各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法,其中常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。

更新时间:2021-10-13型号:Trizol提取法厂商性质:生产厂家浏览量:154

组织细胞RNA提取试剂盒(Trizol提取法)

产品货号:11131

产品规格:50T/100T

产品简介:

RNA的种类来源比较多,提取制备的方法各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法,其中常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶,保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后,溶液形成上层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上层用异丙醇沉淀回收总RNA,中间层用乙醇沉淀回收DNA,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。组织细胞RNA提取试剂盒(Trizol提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少。

产品组成:

名称

50T

100T

保存条件

试剂(A): Trizol Reagent  

50ml

100ml

4℃,避光

试剂(B): RNA 分离液

10ml

20ml

室温,避光

试剂(C): DNA沉淀液

50ml

100ml

室温

试剂(D): RNA洗涤液

10ml

100ml

室温

试剂(E): RNase-free ddH2O

10ml

20ml

室温

        试剂(F): RNA 保存液              10ml               20ml        4℃,避光

自备材料:

1. 液氮\研钵或匀浆器

2. 经 RNase free 处理的移液器吸头、EP 管等耗材

3. 低温高速离心机、低温冰箱


操作步骤(仅供参考)

  1. 样品准备

    ⑴ 贴壁细胞:①直接裂解:直接在培养瓶/皿中加入 Trizol 裂解细胞,每 10cm2面积加 1ml,用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化:用无菌 PBS 洗涤细胞后,加入含有 0.05~0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无 RNase 的离心管中,以下参考悬浮细胞相关操作步骤。

    ⑵ 悬浮细胞:无需清洗细胞,直接 5000~6000g 离心 5min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低 RNA 收获率。每 5×106~107,动物、植物和酵母细胞或每 10 细菌细胞加入 1ml Trizol,充分振荡混匀。

    ⑶ 组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50~100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入 1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过 Trizol 体积的 10 %。研磨要迅速,以 1min 为佳。⑷ 血液:取 0.5~1 ml 新鲜或冻存的血液,12000g 离心 5 min,去除血浆,加入 1 ml Trizol,充分振荡混匀。

2. 核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5~10 min 后,充分振荡,反复 1~3 次)。将裂解样品或匀浆液室温静置 5~10min,使核蛋白与核酸完全分离。

3. 样品分层:加入 0.2 ml RNA 分离液,振荡 15 s,室温静置 2~3min。12000 g 4℃离心 10~15 min。上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA 在上层水相。4. 沉淀 RNA:吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase

4. 沉淀 RNA:吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染),加入等体积 RNA 沉淀液混匀,室温放置 15~20min。12000 g 4℃离心 10min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。

5. 洗涤 RNA:加入 1ml RNA 洗涤液轻轻洗涤沉淀,室温放置 5~10min,7500g 4℃离心 5min,弃上清。室温干燥 5~10min,不宜过分干燥,否则 RNA 难以溶解。

6. 溶解 RNA:加入 30~50ul RNase-free dd H 2 O 充分溶解,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品沉淀用 RNA 保存液溶解。


注意事项:

1. 样品保存:加入 Trizol 混匀后,样品可在-70℃放置 1~2 月;RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2~4周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存

2. Trizol Reagent 和 RNA 分离液含有腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。

3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。



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