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Lezol(总RNA提取试剂) 核酸类

简要描述:

Lezol(总RNA提取试剂) 核酸类适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100mg组织、5×10细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>10细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。Lezol具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少

更新时间:2021-09-23型号:厂商性质:生产厂家浏览量:42

Lezol(总RNA提取试剂盒)  核酸类

产品货号:T11163

产品规格:50ml/100ml

产品简介:

Lezol(总RNA提取试剂) 核酸类 Lezol是一种尚宝生物自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA提取试剂。Lezol采用不Invitrogen TRIzol相似的原理和方法,Lezol颜色、抽提的方法和步骤亦不Invitrogen TRIzol完全相同。Lezol含酚和异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶,保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后,溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA,中间层用乙醇沉淀回收DNA,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。尚宝生物 Lezol适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100mg组织、5×10细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>10细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。Lezol具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程1小时内完成;③纯度高;④污染少。

产品组成:

产品名称

规格

保存温度

Kodak D-19显影液

50ml/100ml

4℃,避光

自备材料:    

1. 试剂:无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。 

2. 耗材: RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中,RNase是导致RNA降解的最主要物质,非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase,移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。 

3. 仪器:低温高速离心机、低温冰箱。

操作步骤(仅供参考):    

1. 样品准备

 (1) 贴壁细胞:

 1 接裂解:直接在培养瓶/皿中加入Lezol裂解细胞,每10cm面积加1ml Lezol,用移液器吹打混匀。

 2 胰蛋白酶消化:用无菌PBS洗涤细胞后,加入含有0.05~0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无RNase的离心管中,5000~6000g离心5min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低RNA收获率。血液:取0.5~1 ml新鲜或冻存的血液,12000g离心5min,去除血浆,加入1ml Lezol,充分振荡混匀。 

2. 核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5~10min后,充分振荡,反复1~3次),将裂解样品或匀浆液室温放置5~10min,使核蛋白不核酸完全分离。 

3. 样品分层:加入0.2ml氯仿/1ml Lezol,剧烈振荡15s,室温放置2~3min。置于4℃离心机,12000g离心10~15min。上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA在上层水相。 

4. 沉淀RNA:吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染),加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积尚宝生物Trizol与用RNA沉淀液,超低温冰箱放置2~3hr,可以大大提高RNA回收率),室温放置15~20min。12000g 4℃离心10min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。

 5. 洗涤RNA:加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Lezol洗涤沉淀(或者加入1ml尚宝生物Trizol与用RNA洗涤液,可以大大提高RNA纯度),室温放置5~10min,7500g 4℃离心5min,弃上清。室温干燥5~10min,不宜过分干燥,否则RNA难以溶解。

 6. 溶解RNA:加入30~50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品,沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。

分析与定量:

1. 测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8~2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。

 2. 进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。

 3. 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。

注意事项:

1. 样品保存:加入 Lezol 混匀后,样品可在-70℃放置 1~2 月;RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2~4 周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。

 2. Lezol 是强腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。

 3. Lezol 可常温运输,建议保存 4℃保存。

 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


有效期:

12个月有效。


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尚宝主营产品:

试剂盒

· 细胞活力/毒性检测试剂盒

· 蛋白提取相关试剂盒

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