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组织细胞RNA提取试剂盒

简要描述:

组织细胞RNA提取试剂盒(异硫氰酸胍提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织、>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于N orthern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程90min内完成;③纯度

更新时间:2021-08-27型号:厂商性质:生产厂家浏览量:99

组织细胞RNA提取试剂盒(异硫氰酸胍提取法)产品货号:11132产品规格:50T/100T产品简介:RNA的种类来源比较多,提取制备的方法各异,一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法,其中常用的是苯酚法,即Trizol法提取RNA。异硫氰酸胍作为强的阴离子表面活性剂,可以有效的解离核蛋白与核酸的复合体,并对RNase产生强烈的抑制作用,保持RNA的完整性。加入氯仿等试剂并离心,上层清液用异丙醇沉淀回收总RNA。组织细胞RNA提取试剂盒(异硫氰酸胍提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织、>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于N orthernblot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点:①适用范围广;②操作简单,整个过程90min内完成;③纯度高;④污染少。产品组成:试剂名称 50T 100T 保存条件试剂(A): RNA 提取液 30ml 60ml 4℃,避光试剂(B): 乙酸钠缓冲液 3ml 6ml 室温试剂(C): RNA 分离液 30ml 60ml 4℃,避光试剂(D): RNA 沉淀液 30ml 60ml 室温试剂(E): RNA 洗涤液 50ml 100ml 室温试剂(F): RNase-free ddH2O 10ml 20ml 室温试剂(G): RNA 保存液 10ml 20ml 4℃,避光自备材料:1. 液氮、研钵或匀浆器2. 经 RNase free 处理的移液器吸头、EP 管等耗材3. 低温高速离心机、低温冰箱4. 无菌 PBS 缓冲液操作步骤 (仅供参考) :1. 实验准备:RNA 分离液室温放置 15min 确保两相分开,无菌 PBS 缓冲液、RNA 提取液和 RNA 沉淀液冰上预冷。2. 样品准备⑴ 贴壁细胞:①直接裂解:直接在培养瓶/皿中加入 RNA 提取液裂解细胞,每 10cm2面积加 1ml,用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化:用无菌 PBS 洗涤细胞后,加入含有 0.05~0.25 %胰蛋白酶的 PBS 处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无 RNase 的离心管中,以下参考悬浮细胞相关操作步骤。⑵ 悬浮细胞:收集(1~5)×106~107动物、植物和酵母细胞或 107细菌细胞加至 1.5ml 离心管,5000~6000g 离心5min,用无菌 PBS 重悬细胞沉淀,再次 5000~6000g 离心 5min 收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将溶液去除干净,否则裂解不完全,降低 RNA 收获率。向沉淀中加入加入 0.5ml RNA 提取液,充分振荡混匀。⑶ 组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50~100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入 0.5ml RNA提取液研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过提取液体积的 10%。研磨要迅速,以 1min 为佳。⑷ 血液:取 0.5~1ml 新鲜或冻存的血液,12000g 离心 5min,去除血浆,加入 0.5ml RNA 提取液,充分振荡混匀。3. 核酸分离:将细胞液或匀浆液转移至 1.5ml 离心管,加入 1/10 体积的乙酸钠缓冲液,颠倒混匀 5~6 次。加入RNA 分离液,颠倒混匀 5~6 次后震荡 10-20s,冰上放置 15 min,使核蛋白与核酸完全分离。4. 样品分层:12000 g 4℃离心 10~15min。RNA 在上层水相。5. 沉淀 RNA:吸取上层水相(约 0.5ml)转移至新的 1.5ml 离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染),加入等体积 RNA 沉淀液混匀,冰上放置 10~15 min。12000 g 4℃离心 10min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。6. 洗涤 RNA:加入 1ml RNA 洗涤液轻轻洗涤沉淀,冰上放置 5~10min,7500g 4℃离心 5min,弃上清。室温干燥 10~30min,不宜过分干燥,否则 RNA 难以溶解。7. 溶解 RNA:加入 30~50ul RNase-free dd H2O 充分溶解,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品沉淀用 RNA 保存液溶解。注意事项:1. 样品保存:加入 RNA 提取液混匀后,样品可在-70℃放置 1 月;RNA 样品可以在 70 %酒精中-70℃保存 2~4 周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。2. RNA 提取液和 RNA 分离液含有腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期:12 个月有效。常温运输,4℃保存。

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