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通用基因组DNA提取试剂盒

简要描述:

通用基因组DNA提取试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、 Southern杂交等实验。

更新时间:2021-08-25型号:厂商性质:生产厂家浏览量:84

通用基因组DNA提取试剂盒产品货号:26240产品规格:50T/100T产品简介:本试剂盒为通用型,适合于从土壤,粪便,昆虫,以及其他样本中提取基因组DNA。对细菌,真菌,昆虫等样本都具有很好的裂解效果,最大限度的保留了生物DNA的多态性。使用本试剂盒提取的DNA产量大、完整性好,可直接用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、 Southern杂交等实验。产品组成:试剂名称 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 25ml 50ml溶液 B 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脱液 15ml 30ml吸附柱 50 个 100 个收集管 50 个 100 个操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。1. 样品的处理:1)土壤:称取 0.1-0.3g (根据干湿)土壤,放入研钵中,倒入适量的液氮,立即研磨,重复 3 次,使土壤颗粒研成粉末,加 500ul 溶液 A,振荡至彻底悬浮。2)粪便:称取 0.1-0.3g (根据干湿) 粪便,加 500ul 溶液 A,振荡至彻底悬浮。3)昆虫:称取 0.1-0.3g 昆虫,倒入适量的液氮,立即研磨,重复 3 次,使昆虫研成粉末,加 500ul 溶液 A,振荡至彻底悬浮。4)未知样品,如为细未状,可直接称取 0.1-0.3g(根据干湿)加 500ul 溶液 A,如为块状,可 0.1-0.3g 用液氮研磨成粉未,再加 500ul 溶液 A,振荡至彻底悬浮。2. 向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A(10mg/ml),55℃放置 10min。3. 加入 20ul 的蛋白酶 K(10mg/ml),充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000转离心 10min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。4. 加入 500ul 溶液 B,充分混匀。如出现白色沉淀,于 55℃放置 5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取 DNA 量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。5. 加入 500ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置 2min (分两次加入,每次 700ul)。6. 12000rpm 离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。9. 12000rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm 离心 2min。11. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。注意事项:1. 由于样品不同,最终提取的 DNA 含量和纯度也有所不同,一般来说,如果所提取 DNA 用电泳的方法检测不到,PCR 会有结果,样品尽可能的新鲜。否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。3. 如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。5. DNA 浓度及纯度检测(浓度较高时):得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在OD260 处有显著吸收峰, OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。保存条件:室温(15-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2-8℃保存时间更长。开封后请将 RNase A,蛋白酶 K 于-20℃保存。

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