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全血基因组DNA提取系统(沉淀法)

简要描述:

全血基因组DNA提取系统(沉淀法)产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取 血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。

本产品使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。

更新时间:2021-08-25型号:厂商性质:生产厂家浏览量:93

全血基因组DNA提取系统(沉淀法)产品货号:26237产品规格:50T/100T产品简介:产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。本产品使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。处理血液量 1ml 5ml 10ml红细胞裂解液(1×) 5ml 25ml 50ml白细胞裂解液 0.5ml 2.5ml 5ml蛋白沉淀液 0.5ml 2.5ml 5ml异丙醇 1ml 5ml 10ml75%乙醇 1ml 5ml 10mlDNA溶解液 100μl 0.5ml 1ml产品组成:试剂名称 50T 100T10×红细胞裂解液 30ml 60ml白细胞裂解液 30ml 60ml蛋白沉淀液 30ml 60mlDNA 溶解液 15ml 30ml操作步骤:以 1ml 全血为例1. 样品的处理:在血液中加入 3 倍体积的 1×红细胞裂解液(请确认已经稀释过),充分颠倒混匀,12000rpm 离心 1min(如为大量提取并且为大离心机,可 11000 转离心 5min),小心吸去上清,再加入 2 倍体积的 1×红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。2. 向沉淀中加 500ul 白细胞裂解液,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀。65℃水浴 10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。3. 加入 500ul 蛋白沉淀液,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴 5min,12000rpm 离心 5min,小心吸取 上清(不要吸到下层沉淀或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,如还有沉淀物,可再次离心。4. 在上清中加入 1ml 异丙醇,混匀。12000rpm 离心 5min,可看到管底有少量白色 DNA 沉淀,弃掉上清。5. 向离心管中加入 1ml 75%乙醇,12000rpm 离心 5min,弃去上清液。可再次短暂离心用移液器去除残余上清。6. 将离心管敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,否则乙醇可能影响后续的实验如酶切、PCR 等。7. 向离心管中加入 100-300ul DNA 溶解液,室温放置让 DNA 自然溶解。如果 DNA 难于溶解,可室温放置过夜或将 离心管置于 50-60℃水浴中水浴加热 5min。注意事项:1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。3. DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰,OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/OD280 比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。保存条件:室温(15-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2-8℃保存时间更长。全血基因组DNA提取系统(沉淀法)

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