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革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒

简要描述:

革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞 中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

更新时间:2021-11-30型号:厂商性质:生产厂家浏览量:42
  产品货号:26228
 
  产品规格:50T/100T
 
  产品简介:
 
  本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、 PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
 
  产品组成:
 
  试剂名称 50T 100T溶菌酶 0.3g 0.5gRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15ml 15ml×2洗脱液 15ml 30ml吸附柱 50 个 100 个收集管 50 个 100 个操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
 
  1. 取细菌培养液 1ml,12000rpm 离心 1min.,尽量吸除上清。
 
  2. 向菌体中加入 200ul 终浓度为 20mg/ml 的溶菌酶,用溶菌酶干粉加入缓冲液 20 mM Tris, pH 8.0;2 mMNa2-EDTA;1.2% Triton X-100,37℃处理 30min 以上。(如果需要去除 RNA,可加入 20ul RNase A(10mg/ml)溶液)
 
  3. (可选作)向上述溶液中加入 200ul 溶液 A,振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮,室温放置 30min-60min。
 
  4. 向管中加入 20ul 的蛋白酶 K (10mg/ml),充分混匀,55℃消化 30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止,此时可见菌液呈清亮粘稠状。
 
  5. 向管中加入 200ul 溶液 B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可于 75℃放置 15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如果溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能会导致 DNA 的提取量以及纯度降低,还可能堵塞吸附柱。
 
  6. 向管中加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时还可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中,静置 2min。
 
  7. 12000rpm 离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
 
  8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
 
  9. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 l min, 弃废液,将吸附柱放入收集管中。
 
  10. 12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR 等。
 
  11. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm 离心 1min。
 
  12. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min ,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的细菌基因组 DNA。
 
  注意事项:
 
  1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量下降。
 
  2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。
 
  3. 如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况,可适当延长离心时间。
 
  4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围), pH 值低于 7. 0 会降低洗脱效率。DNA 产物应保存在-20℃,以防 DNA 降解。
 
  5. DNA 浓度及纯度检测:得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA 应在 OD260处有显著吸收峰,OD260 值为 1.0 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、40μg/ml 单链 DNA。OD260/0D280 比值应为 1.7-1.9,如果 洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值,但并不 表示纯度低。
 
  保存条件:
 
  室温(15-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2-8℃保存时间更长。

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