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动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

简要描述:

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离 心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞 中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:33

动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

产品货号:26221

 产品规格:50T/100T 

产品简介:本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。 


产品组成:试剂名称 50T 100TRNase A 1ml 1ml×2蛋白酶 K 1ml 1ml×2溶液 A 10ml 20ml溶液 B 10ml 20ml漂洗液 15m1 15ml×2洗脱液 10m1 20m1吸附柱 50 个 100 个收集管 50 个 100 个 


操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

  1. 样品的处理:

    a、细胞:取 1×106 -1×107 个悬浮培养细胞,12000rpm 离心 1min 收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理,再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,振荡至彻底混匀。

    b、组织:组织量不宜过大,一般不要超过 25mg,可以使用匀浆器匀浆,最好用液氮研磨成粉末状,再用预冷的PBS 或无菌水充分悬浮,然后 12000rpm 离心 1min 收集细胞,尽量除去上清,加 200ul 溶液 A,振荡至彻底混匀。

    2. 向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),55℃放置 15min。

    3. 加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,55℃水浴消化,细胞消化时间较短,组织消化时间较长,一般需要 1-3 个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)。消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。 消化完全的指标是:液体清亮及粘稠。

    4. 加入 200ul 体积溶液 B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可放置于 75℃15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致堵塞吸附柱。5. 加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

    6. 12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

    7. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

    8. 向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

    9. 12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

    10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm 离心 2min。

    11. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。

    注意事项:

    1. 试剂盒拆封后,RNase A 和蛋白酶 K 需放置-20℃保存

    2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

    3. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在 65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

    4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围),pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。

    保存条件:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期 12 个月,2-8℃保存时间更长。


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