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哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

简要描述:

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法,可以抽提到100~150kb以上的基因组 DNA,提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为,从1g组织可以提取到约150~200μg 100kb以上的基因组DNA,从10 ~10 Hel

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:38

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒 

产品货号:11065

 产品规格:50T/100T

 产品简介:

 用分子生物学技术研究复杂的基因组,首先要求制备纯净的高分子质量DNA,一般分为两个步骤,先裂解细胞、溶解DNA,接着采用酶学或化学方法去除蛋白、RNA以及其他大分子。

尚宝生物 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)采用经典的蛋白酶K处理法,可以抽提到100~150kb以上的基因组DNA,提取的基因组DNA可用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。该试剂盒的提取效率大致为,从1g组织可以提取到约150~200μg 100kb以上的基因组DNA,从10 ~10 Hela细胞可以提取到约5~50μg 100kb以上的基因组DNA。该试剂盒仅用于科研领域,不适用于临床诊断或其他用途。

 产品组成:


 试剂盒内容 50T 100T 保存条件试剂(A): 样品裂解液 50ml 100ml 4℃试剂(B): 蛋白酶K溶液 150μl 300μl -20℃,避光试剂(C): 乙酸铵溶液 10ml 20ml 室温试剂(D): Nuclease Free Water 10ml 20ml 室温自备材料:1. 组织或培养细胞2. PBS3. 无水乙醇、70%乙醇4. 25:24:1 酚/氯仿/异戊醇 

操作步骤 (仅供参考) :


 1. 准备样品:①组织样本:切下组织并立即剪成小块,置于液氮中冻结。将 100mg~1g 冻结的组织用预冷的研钵和研杵研碎或用锤子将其捣成碎末。培养细胞:收集贴壁生长或悬浮生长细胞培养液,贴壁生长细胞需先用胰蛋白酶消化液消化,再用 PBS 清洗一次。4℃离心机,1000~2000g 离心 1~2min,弃上清。用 1~10ml 预冷的 PBS 再次悬浮离心,如此 2 次洗涤。


 2. 每 1ml 样品裂解液加入 5μl 的蛋白酶 K 溶液,混匀。每 50mg 组织或 5×107 细胞用 0.5~0.6ml 样品裂解液悬浮,悬浮应彻底,不应留下结块。 


3. 充分混匀,50℃振荡下温育 12~18h 或过夜。


 4. 加入等体积 25:24:1 酚/氯仿/异戊醇,轻轻混合,尽可能减少对 DNA 的剪切。


 5. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体),剩余的水相用等体积酚/氯仿/异戊醇再抽提一次。重复该步骤 1 次。 


6. 吸取上层液(水溶液)250~300μl 至新 EP 管中,加入等体积无水乙醇和 1/4 体积的乙酸铵溶液,颠倒混匀数次。


 7. 4℃ 10000g 1min,弃上清。


 8. 加入 70%乙醇,4℃ 10000g 1min,弃上清。重复该步骤一次。


 9. 尽量吸除残余的乙醇,空气干燥,等到不到明显液体时,立即加入 50~100μl Nuclease Free Water 溶解 DNA,4℃或-20℃保存。注意:不可过分干燥基因组 DNA 沉淀,否则会极难溶解。如果发现 DNA 沉淀难以溶解,可以在 4℃用摇床缓慢摇动过夜,以溶解 DNA 沉淀。


 10. A 260 /A 280 处检测 DNA 纯度,高纯度的 DNA 一般 A 260 /A 280>1.8。


 注意事项:


 1. 如果打算提取大片段的基因组 DNA,应尽量避免基因组 DNA 的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA 的样品,可以用剪掉枪头尖的枪头吸取基因组 DNA 的样品。


 2. 准备细胞样品时,如果细胞量过少(<3×107 ),应 0.3ml 含蛋白酶 K 的样品裂解液。


 3. 为避免高分子质量 DNA 被剪切,可以不采用乙醇沉淀 DNA,可用透析袋替代乙醇:在 100 倍体积的 TE buffer中至少透析 2 次,所用取全部时间应>24h。


 4. 不可过分干燥基因组 DNA 沉淀,否则会极难溶解。5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


 有效期:6 个月有效。

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