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λ噬菌体基因组DNA提取试剂盒(PEG沉淀法)

简要描述:

尚宝λ噬菌体基因组DNA提取试剂盒(PEG沉淀法)是简便的λ噬菌体基因组DNA的试剂盒,其提取原理是通过 PEG沉淀、酚异戊醇等提取,残留碎片通过沉淀离心去除,通过一系列快速的漂洗、离心步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,即可获得λ噬菌体基因组DNA,可进行酶切、PCR等下游实验。仅用于科研领域,不用于临床诊断或治疗

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:29

λ噬菌体基因组DNA提取试剂盒(PEG沉淀法)

产品货号:11137

 

产品规格:50T/100T

 

产品简介:

λ噬菌体是最早使用的克隆载体,其基因组是长度约为50kb的双链DNA分子,其在宿主细胞由两种生活途径:1裂解生长:环状DNA分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次感染;2、溶源性生长:感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制,并遗传给子代细胞,宿主细胞不裂解。科研人员常常利用λ噬菌体裂解生长的特点,培养获取大量的λ噬菌体颗粒,并提取λ噬菌体DNA。噬菌体载体广泛用于文库筛选,目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作。λ噬菌体裂解培养物离心后的上清首先用RNase A /DNase混合酶消化去除残留的宿主DNA/RNA,沉淀收集噬菌体,通过酚异戊醇等提取,残留碎片通过沉淀离心去除,通过一系列快速的漂洗、离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,获得 DNA 的量很高,但是纯度一般,但是足够用于大

多数分子生物学实验。

尚宝λ噬菌体基因组DNA提取试剂盒(PEG沉淀法)是简便的λ噬菌体基因组DNA的试剂盒,其提取原理是通过 PEG沉淀、酚异戊醇等提取,残留碎片通过沉淀离心去除,通过一系列快速的漂洗、离心步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,即可获得λ噬菌体基因组DNA,可进行酶切、PCR等下游实验。仅用于科研领域,不用于临床诊断或治疗。

 

产品组成:

产品名称

50T

100T

保存条件

试剂(A): RNase A

10mg

20mg

-20

试剂(B): DNaseⅠ

10mg

20mg

-20

试剂(C): 噬菌体沉淀液

200ml

400ml

4

试剂(D): SM buffer

50ml

100ml

4

试剂(E): 噬菌体裂解液

2ml

4ml

室温

试剂(F): 蛋白清除液

100ml

200ml

4℃,避光

试剂(G): 噬菌体漂洗液

100ml

200ml

室温

试剂(H): TE buffer

5ml

10mg

室温

 

自备材料:

1. 离心管

2. 低温离心机、摇床

3. 70%乙醇

 

操作步骤(仅供参考):  以下操作以10ml噬菌体感染细菌培养上清液为例。

1. 准备工作:向RNase ADNase I分别加入1mlTE buffer吹打,颠倒混匀,充分溶解RNase ADNase I后,按照每次使用量分装-20℃冻存,6个月有效。

2. 0.10.5%氯仿处理后的λ噬菌体感染的12ml液体培养液转移至离心管,800010000g离心10min去除细菌碎片,取上清液。一般建议8000g离心,如果效果不佳可以考虑10000g,但转速过高容易导致噬菌体也沉淀至管底,降低产量。

3. 10ml上清液,加入5μl RNase A10μl DNase I,充分混匀,37℃培养30min

注意:噬菌体培养上清液会因生长和裂解情况不同致使残留的RNA/DNA量不液不同,RNase/DNase消化过度,可能减少产量;消化不完全,DNARNA可粘走部分噬菌体,一般RNase可以进行调整,可根据实际情况适当调节用量和消化时间。

4. 向上清液中加入4ml噬菌体沉淀液,摇匀至溶解,冰浴1h4℃过夜。

5. 4℃ 10000g 离心20min,弃上清液。

6. 加入1ml SM buffer充分清洗管壁及沉淀,转移至新的离心管或微量离心管,加入40μl噬菌体裂解液,68℃培养 15min

7. 加入等体积蛋白清除液,轻轻混匀,12000g离心5min,取上清液。

8. (备选步骤)转移上清液至新的离心管中,加入等体积预冷的噬菌漂洗液,轻轻混匀,-20℃孵育1h4℃ 12000g 离心10min,弃上清液。

9. 加入适量的70%乙醇溶液,混匀,4℃ 8000g离心8min,弃上清液。如果有必要,可以重复1次该清洗步骤。

10. 室温自然干燥DNA,加入适量TE buffer-20℃保存。TE buffer体积越大,DNA浓度越低。

 

注意事项:

1. 用于裂解的噬菌体、宿主菌越新鲜,裂解越好、收获量越大。

2. 液体培养裂解时,到了时间裂解还没发生,可适当的提高温度或加大振摇速度。

3. RNase/DNase消化过度,可能减少产量;消化不完全,可粘走部分噬菌体。

4. 噬菌体裂解液在低温下易结晶析出白色物质,可37℃温浴至完全溶解。

 

有效期:6个月有效。


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