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RNA病毒基因组提取试剂盒

简要描述:

RNA病毒基因组提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组
的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:103

RNA病毒基因组提取试剂盒 

产品货号:26239 

产品规格:50T/100T 

产品简介: 

本试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组,不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。产品组成:试剂名称 50T 100T蛋白酶 K 1ml 2ml洗柱液 50ml 50ml×2结合液 25ml 50ml漂洗液 15ml 15ml×2RNase free ddH2O 15ml 15ml×2RNase free 吸附柱 50 个 100 个RNase free 收集管(2ml) 50 个 100 个 

操作步骤:使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇,加入到离瓶口约 0.5-1cm 距离,盖好摇匀。所有离心步骤均在 2-8℃条件下进行。

 1. 取病毒上清液 0.5ml,12000rpm 离心 5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀(如无沉淀可省去此步)。


 2. 向病毒上清中加入 20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K,充分混匀,65℃消化 10min,期间可颠倒离心管混匀数次。


 3. 吸附柱前处理:从包装中取出吸附柱,放入收集管中,加入 700ul 洗柱液,室温放置 2 分钟,2-8℃12000rpm离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中待用。

 4. 向病毒上清中加入 500ul 结合液,充分混匀。再向管中加入 400ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 RNA 的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置 2min。(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)


 5. 12000rpm 离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。


 6. 向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。


 7. 向吸附柱中加入 500ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 


8. 12000rpm 离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。


 9. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul经65℃水浴预热的RNase free ddH2O,室温放置 5min,12000rpm 离心 2min。即可得到高质量的病毒基因组 RNA。


 注意事项:

 1. 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致 RNase 污染。使用无 RNase 的塑料制品和 枪头避免交叉污染。 


2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 RNA 提取量也下降。 


3. 若结合液中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解。


 4. 如果样品消化不彻底,后面的离心步骤中可能会出现堵柱子的情况,可适当延长离心时间。


 5. 洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率。


 6. RNA 产物应保存在-70℃,以防 RNA 降解。


 7. RNA 检测:得到的基因组 RNA 片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。由于病毒不含有核糖体RNA,所以常规电泳无法检测,只有后期实验才可检测到。D260 值为 1 相当于大约 40 μg/ml 单链 RNA。 


保存条件:室温(15℃-25℃)干燥条件下可保存 12 个月,更长时间的保存可置于 2℃-8℃。

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