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DNA病毒基因组提取试剂盒

简要描述:

DNA病毒基因组提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组,不适合于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:63

DNA病毒基因组提取试剂盒

产品货号:10268

 

产品规格:50T/100T

 

产品简介:

DNA病毒基因组提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组,不适合于RNA病毒基因组的提取使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

 

产品组成:

试剂名称

50T

100T

蛋白酶K

1ml

1ml×2

溶液V

25ml

50ml

漂洗液

15ml

15ml×2

洗脱液

10ml

20ml

吸附柱

50

100

收集管

50

100

 

操作步骤(仅供参考)

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1. 取病毒上清液0.5ml12000rpm离心5min,尽量吸尽上清使用,弃去沉淀。

2. 向病毒上清中加入20ul的蛋白酶K10mg/ml),充分混匀,65℃消化10-20min,期间可颠倒离心管混匀数次。

3. 向管中加入500ul溶液V,充分混匀。再向管中加入400ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,静置2min。(吸附柱的最大容积为750ul,可分两次加入。一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。)

4. 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

5. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

6. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7. 12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

8. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50ul-100ul65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min12000rpm离心1min

9. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min12000rpm离心2min,即可得到高质量的病毒基因组DNA

 

注意事项:

1. 蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3. 若溶液V中有沉淀,可在37℃水浴中重新溶解再使用,不影响效果。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少50ul,体积过小会影响回收效率。洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)pH值低于7.0会降低洗脱效率。 DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与病毒的保存条件和种类等因素有关。D260值为1.0相当于大约50ug/ml双链DNA40ug/ml单链DNAOD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

6. 如果病毒含量过低,最后提取的基因组DNA电泳可能无法检测到,但 PCR等其他实验还会有结果。

 

有效期室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。

 


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