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柱式细胞基因组提取试剂盒

简要描述:

柱式细胞基因组提取试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

更新时间:2021-08-24型号:厂商性质:生产厂家浏览量:26

柱式细胞基因组提取试剂盒

产品货号:28104

产品规格:50/100/200

产品简介:

   柱式细胞基因组提取试剂盒适合于从哺乳动物细胞中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量最大为50 kbDNA片段,纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCRReal-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

包装清单:

产品名称

50次包装

100次包装

200次包装

储存条件

BufferGL

10ml

20ml

40ml

室温

Buffer PS

10ml

20ml

40ml

室温

Buffer PW

9ml

18ml

36ml

室温

Buffer EB

5ml

10ml

20ml

室温

Spin Columns

50

100

200

室温

Collection Tubes

50

100

200

室温

自备试剂:使用前Buffer PW 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇。

操作步骤:

材料处理:

1. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(最大提取量为5×106个细胞),2000rpm400×g)离心5分钟,弃尽上清,加200 μl Buffer GL,振荡至样品彻底悬浮。

2. 如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl的浓度为100 mg/mlRNase A溶液,涡旋15秒。剧烈涡旋震荡并用移液器吹打充分混匀,室温放置5-10分钟。

3. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入200μl Buffer PS12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

4. 将步骤3所得溶液短暂离心,全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,若一次不能加完溶液,可分多次转入。12000 rpm离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

5. 向吸附柱中加入450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。  注意:如果纯化的DNA用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入Buffer PW静置2-5分钟再离心。

6. 重复步骤5

7. 12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。

注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。8.将吸附柱放到一个新的1.5 ml离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加50μl Buffer EB,室温放置2分钟。12000 rpm离心1分钟,收集DNA溶液。-20℃保存DNA

注意:1)洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其pH值在7.0-8.5之间(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)。2)为了提高基因组提取量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟。3)洗脱体积不应小于30μl,体积过少会影响回收效率。

注意事项

1. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

2. 所有离心步骤均可室温下进行。


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