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高纯度质粒小提试剂盒

简要描述:

高纯度质粒小提试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

更新时间:2021-08-23型号:厂商性质:生产厂家浏览量:32

高纯度质粒小提试剂盒

产品货号:26210

产品规格:50/100/200

产品简介:

高纯度质粒小提试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

包装清单:

自备试剂:使用前Buffer PE 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇

操作步骤:

1. -5 ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中,12000 rpm离心30秒收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1,使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀。

注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入250μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀4-6次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。

注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。

4. 此步骤所用时间应不超过5分钟,避免质粒受到破坏。

5. 向离心管中加入350μl Buffer N3,立即温和地上下颠倒混匀8-10次,充分混匀,此时应出现白色絮状沉淀。12000 rpm离心5分钟。

注意:Buffer N3加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。

6. 将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,12000 rpm离心30秒钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB12000 rpm离心30秒。

8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE(请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。

9. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入50μl BufferEB,室温放置1分钟,12000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

注意:

1. 为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。

2. 质粒拷贝数较低或>10 kb时, Buffer EB65~70℃水浴预热,可以增加提取效率。

注意事项:

1. 前若发现Buffer P2Buffer N3Buffer PB有沉淀,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。

2. 第一次使用前应按照说明在Buffer PE中加入144ml无水乙醇。

3. 注意不要直接接触Buffer P2 Buffer N3Buffer PB,使用后应立即盖紧盖子。

4. 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关



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