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磷酸化蛋白提取试剂盒

简要描述:

磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。

更新时间:2021-07-19型号:厂商性质:生产厂家浏览量:77

磷酸化蛋白提取试剂盒 

产品货号:15231 

产品规格:50T/100T 

产品简介: 

磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为强烈,可获得总蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

本品仅用于科研。

 产品组成: 

                              试剂名称                            50T               100T                 保存条件 

                                 裂解液                            50mL            100mL                  2~8℃ 

                      磷酸酶抑制剂(100×)              0.5mL            1mL                      -20℃

                      蛋白酶抑制剂(100×)              0.5mL            1mL                      -20℃

                           PMSF(100×)                    0.5mL            1mL                      -20℃ 

 操作步骤:

 在 1mL 的冷裂解液中各加入 10µL 的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和 PMSF;混匀,放置在冰上备用; 

  1. 组织总蛋白的提取

    1) 称取 0.1g 的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入 0.5-1mL的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;

    2) 将组织匀浆液移入 1.5mL 的 EP 管中,4℃12000g 离心 30min;

    3) 吸取上清至新的管中;

    4) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

    2. 细胞总蛋白的提取

    1) 裂解液的用量:107个细胞需要裂解液 1mL

    2) 贴壁细胞:弃去培养基,用冷的 PBS 洗两次,弃去 PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入 EP 管中,颠倒裂解 20-30min。

    3) 悬浮细胞:4℃400g 离心收集细胞,用冷的 PBS 洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋 10s,放置冰上裂解 10min,重复 3-4 次;

    4) 裂解完毕之后,将细胞裂解液 4℃12000g 离心 30min;

    5) 将上清移入新的 EP 管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。(提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

    注意事项:

    1. 实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境。

    2. PSMF(有毒)现用现加,因为 PMSF 在水溶液中会快速降解。

    有效期:12 个月有效。


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