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Triton X-100细胞裂解液 蛋白类

简要描述:

Triton X-100细胞裂解液 蛋白类是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于 PAGE电泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。

更新时间:2021-07-09型号:厂商性质:生产厂家浏览量:64

Triton X-100细胞裂解液 

产品货号T15196

产品规格:100ml

产品简介:

Triton X-100细胞裂解液是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于 PAGE电泳,Western,免疫沉淀(Immunol PrecipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100NaClTris-HCl 等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。作用原理是利用去污剂Triton X-100 破坏脂质双分子层,溶解胞质和细胞膜,破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在0.1%1%时即可满足几乎所有溶解的需求,且可补充等离子浓度的盐及使pH 接近中性。不宜用 Bradford 法测定由Triton X-100 Lysis Buffer获得样本的蛋白浓度。

 

产品组成:

试剂名称

规格

保存条件

Triton X-100 Lysis Buffer

10ml

-20

PMSF(100mM)

1.5ml

-20

 

操作步骤(仅供参考)

()贴壁培养细胞

  • Triton X-100 Lysis Buffer 室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM
  • 去培养液,用PBSNS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
  • 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于细胞13s内,细胞就会被裂解。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()悬浮培养细胞 

  • Triton X-100 Lysis Buffer室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM
  • 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
  • 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入尚宝生物Triton X-100 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl
  • 再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的 SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()组织样本

  • Triton X-100 Lysis Buffer 室温溶解混匀后,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM
  • 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
  • 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。
  • 按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解1530min
  • 步骤34亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSFTriton X-100 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

  

注意事项:

  • 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
  • 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
  • 如果细胞量较多,必需分装成50100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
  • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
  • 溶解Triton X-100 Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免有效成分失效。
  • 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验。如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-KBp53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
  • 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。

  

有效期:12月有效。

 

 

 

 

 

 

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