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SDS裂解液 蛋白类

简要描述:

SDS裂解液 蛋白类主要由Tris-HCl、NaCl、SDS等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

更新时间:2021-07-09型号:厂商性质:生产厂家浏览量:65

SDS裂解液

目录编号:T16008

 

产品规格:100ml

 

产品简介:

    多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,例如TritonSDSNP-40等。SDS裂解液 (SDS Lysis Buffer)是一种极其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质。其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液()RIPA 裂解液()、通用细胞裂解液、WesternIP细胞裂解液,所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。

尚宝生物 SDS Lysis Buffer主要由Tris-HClNaClSDS等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

 

产品组成:

产品组成

规格

保存温度

SDS Lysis Buffer

100ml

-20

 

注:自备PMSF溶液(100mM )(可参考尚宝P2010)。

 

操作步骤:(仅供参考)

()贴壁培养细胞

  • SDS Lysis Buffe室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使终浓度为1mM
  • 去除贴壁细胞的培养液,用PBSNS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
  • 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例加入SDS Lysis Buffer。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液作用于细胞13s 内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃裂解1530min。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()悬浮培养细胞

  • SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀后,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其最终浓度为1mM
  • 低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
  • 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入SDS Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。通常裂解液作用于细胞13s内,细胞就会被裂解。如果是所提蛋白样品用于 CHIP, 置于冰上或 4℃裂解 1530min
  • 1000012000g4℃离心 510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的 Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

()组织样本 

  • SDS Lysis Buffer置于室温溶解混匀,使用前取适量裂解液加入PMSF,使其最终浓度为1mM
  • 把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
  • 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。
  • 20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解1530min。如果是所提蛋白样品用于CHIP,置于冰上或4℃继续裂解1020min
  • 步骤34亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSFSDS Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,过程尽量控制12min之内,以减少蛋白的降解。如果是所提蛋白样品用于CHIP, 应置于冰上或4℃继续裂解1020min
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等操作。

 

 

注意事项

  • 去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。
  • 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
  • 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/离心管,然后再裂解。少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
  • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
  • 溶解SDS Lysis Buffer时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
  • 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或4℃进行。

 

有效期12个月有效

 

 

 

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