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RIPA裂解液 蛋白类

简要描述:

RIPA裂解液 蛋白类产品简介:

本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS 等。

更新时间:2021-07-09型号:厂商性质:生产厂家浏览量:37

RIPA裂解液

产品货号T16003

 

产品规格:100ml

 

保存条件:运输4℃,长期保存-20℃

 

产品简介:

    RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白 样品可以用于常规的WesternIP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4)150mM NaCl1% Triton X-1001% sodium deoxycholate0.1% SDS等。

 

操作步骤:

  • 对于培养细胞样品:
  • 对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有  干扰,可以不洗)。按照每107细胞加入200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
  • 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照每107细胞加入200微升裂解液  的比例加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,可适量添加裂解液。
  • 充分裂解后,10000-14000rpm离心5-10分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
  • 对于组织样品:
  • 把组织剪切成细小的碎片。
  • 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
  • 用玻璃匀浆器冰上匀浆,直至充分裂解。
  • 充分裂解后,10000-14000rpm离心5-10分钟,取上清,即可进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
  • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。

 

注意事项

  • 裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂干扰,不能用Bradford法测定蛋白浓度,可以选用本公司生产的BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。
  • 用户使用前可根据需要加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入leupeptinaprotinin等其它抑制剂。
  • 裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出,使用前应该37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。
  • 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

 

 

 

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