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NP-40 裂解液 蛋白类

简要描述:

NP-40 裂解液 蛋白类尚宝生物 NP-40 Lysis Buffer 主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40以及sodium pyropho -sphate,β-glycerophosphate,sodium fluoride, EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒和Bradford蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

更新时间:2021-07-08型号:厂商性质:生产厂家浏览量:130

NP-40裂解液 蛋白类

产品货号T16007

 

产品包装100ml

 

产品简介:

NP-40 裂解液  蛋白类多种成分均可以从细胞中提取总蛋白,如TritonSDSNP-40等。NP-40裂解液 (NP-40 Lysis Buffer)是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳、Western、免疫沉淀(Immunol PrecipitationIP)和免疫共沉淀(co-IP) 等,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。

尚宝生物NP-40 Lysis Buffer主要由Tris-HClNaClNP-40以及sodium pyropho -sphateβ-glycerophosphatesodium fluoride, EDTA 等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白,可以用BCA蛋白定量试剂盒和 Bradford 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

 

产品组成:

试剂名称

规格

保存条件

NP-40 Lysis Buffer

100ml

-20

PMSF(100mM)

1.5ml

-20

 

 

NP-40 裂解液  蛋白类操作步骤(仅供参考):

()贴壁培养细胞

  • NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM
  • 去除贴壁细胞的培养液,用PBSNS或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。
  • 按照6孔板每孔加入150250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解1530min,通常裂解液作用于细胞13s内,细胞就会被裂解。
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()悬浮培养细胞

  • NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。
  • 用手指轻弹细胞,使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150200μl含有PMSF的裂解液的比例,加入NP-40 Lysis Buffer通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
  • 1000012000g4℃离心510min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的SDS-PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

()组织样本

  • NP-40 Lysis Buffer 置于室温溶解混匀,加入PMSF,使PMSF终浓度为1mM。把组织剪切成细小的碎片,越小越好。
  • 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在12min之内,以减少蛋白的降解。
  • 按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解3060min
  • 步骤34 亦可以采用如下过程:按照每20mg组织加入150250μl裂解液的比例,加入含有PMSFNP-40 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在12min 之内,以减少蛋白的降解。
  • 1000012000g4℃离心515min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。
  • 进行后续的PAGEWestern、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

 

NP-40 裂解液  蛋白类注意事项:

  • 在贴壁培养细胞的操作步骤中,去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰, 可以不用清洗。
  • 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。
  • 在培养细胞的裂解中,如果细胞量较多,必需分装成50100万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
  • 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
  • 溶解NP-40 Lysis Buffer 时,应尽量缩短溶解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
  • 细胞裂解的操作步骤,应置于冰上或 4℃进行。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期

12个月有效。 

 

 

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