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碘化丙啶PI染色液(50µg/ml)

简要描述:

碘化丙啶PI染色液(50µg/ml)主要由PI、破膜剂等组成,经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测,亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。PI染色液工作浓度为20~50μg/ml,不含RNase,*用于RNA染色,细胞检测含量范围一般为0.1~1×106之间。

更新时间:2021-11-30型号:厂商性质:生产厂家浏览量:356

产品货号:G6230

产品规格:10ml/50ml

 

产品简介:

可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。碘化丙啶 (Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌 合到双链DNA和RNA的碱基对中并与之结合的荧光染料,无碱基特异性。碘化丙啶与双链DNA结合后可以产生 荧光,并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。

细胞内的DNA被Propidium Iodide染色后,可以用流式细胞仪对 细胞进行DNA含量测定,然后根据DNA含量的分布情况,可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。碘化丙啶染色 后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2,正在 进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1~2之间。凋亡细胞由于细胞核发生浓缩以及发生DNA的片段化(DNA fragmentation)导致部分基因组DNA的片断在染色过程中丢失,因此凋亡细胞碘化丙啶染色后呈现明显的弱染,即荧光强度小于1,在流式检 测的荧光图上出现所谓的sub-G1峰,即凋亡细胞峰。细胞凋亡时,流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征,根 据光散射的特点,PI染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。细胞凋亡时,出现凋亡细胞皱缩、染色质浓 缩、核碎裂,产生凋亡小体,使细胞的前向光散射低于正常。

在细胞凋亡的早期,细胞对前向角光散射的能力显 著降低,对侧向光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期,前向和侧向光散射的信号均降低。细胞坏死 时细胞多表现为细胞肿胀,因此前向光散射高于正常,对侧向光散射高于正常。

主要由PI、破膜剂等组成,经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周 期与细胞凋亡检测,亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。PI染色液工作浓度为20~50μg/ml,不含RNase,*用 于RNA染色,细胞检测含量范围一般为0.1~1×106之间。

产品内容:

产品名称 规格 保存温度
碘化丙啶PI染色液(50µg/ml) 10ml/50ml -20℃,避光

   

自备材料:

1. 胰蛋白酶消化液

2. 流式细胞仪

3. PBS

4. 预冷固定液:预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛

 

操作步骤(仅供参考):

1. 细胞样品的制备:

⑴贴壁细胞:

① 小心收集细胞培养液到一个无菌离心管内备用。

② 用胰蛋白酶消化细胞至可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的 贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。

③ 收集上述细胞悬液到离心管内。

④ 4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl培养液,以免吸走细胞。

⑤ 加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管。

⑥ 4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。

⑦ 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl PBS,以免吸走细胞。

⑧ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

⑵悬浮细胞:

① 4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl培养液,以免吸走细胞。

③ 加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管。

④ 4℃,1000g 离心3~5min,使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl PBS,以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

2. 细胞的固定:

 加入1ml冰浴预冷70%乙醇中,轻轻吹打混匀,4℃条件下固定2h或更长时间。4℃固定12~24h 可能效果更佳。

3. 细胞的清洗:

①4℃,1000g 离心3~5min,使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl溶液,以免吸走细胞。

③ 加入约1ml提前预冷的PBS,重悬细胞,并转移至1.5ml无菌离心管。

④4℃,1000g离心3~5min,使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃,可留大约50μl PBS,以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞,避免细胞成团。

4. PI染色:

 在每个待检细胞样品中加入500μl配制好的PI染色工作液,轻轻重悬细胞沉淀,置于37℃避光水浴 30min。

5. 检测与分析:

 用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光,同时检测光散 染色结果: 凋亡细胞G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型,在光散射谱上,前向光散射低于正常,侧向光散射高于正常。

 

注意事项:

1. 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测。

2. 为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

3. 在为了获得细胞沉淀的离心的过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离 心时间。

4. 如果用于组织的细胞周期不细胞凋亡检测,则必须把组织消化后,制备成单细胞悬液,才可以进行检测。

5. 细胞凋亡时,凋亡细胞的标志之一是DNA可染行降低,但这种情况并是的,DNA含量的降低或者 DNA 与染料结合能力下降也会导致 DNA 可染行降低,在分析的时候应特别注意。

6. PI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。

7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: -20℃储存,6个月有效。4℃储存, 1 个月有效。

 

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