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吖啶橙荧光染色试剂盒

简要描述:

吖啶橙荧光染色试剂盒( Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料,可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。因此AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:18

吖啶橙荧光染色试剂盒

产品货号:R21805

产品规格100T

产品简介:

吖啶橙荧光染色试剂盒( Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料,可以标记 DNA、RNA,属于异染性荧光染料。该染料具有膜 通透性,能透过细胞膜,使核 DNA 和 RNA 染色。因此 AO 常用于细胞内 DNA 和 RNA 进行检测。AO 与核酸结合方式主要 有:1、插入性结合,AO 嵌入核酸双链的碱基对之间种结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合,其荧光发射峰为 530nm,激发 后呈绿色荧光;2、静电吸引,带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合,这种结合方式 主要为 AO 与 RNA 的结合,其荧光发射峰为 640nm,激发后呈红色荧光,少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此,吖 啶橙嵌合到双链 DNA 分子中显绿色,与 DNA 单链或 RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光吖啶橙染色试剂盒( Acridine Orange Detection Kit)主要由 Ao Stain、AO Stain Buffer 组成,常用于细胞凋亡的检测。染色后在荧光显微镜 下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均勻荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大 小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚 至消失。吖啶橙染色常与 EB 染色合用双染,EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞 及坏死细胞。

试剂包装:

产品名称  100包装  储存条件
试剂(A): AO Stain  500μl 2-8℃避光 
试剂(B): AO Stain Buffer(10×) 10ml 2-8℃

自备材料:

1.荧光显微镜

2.低速离心机

3.PBS

4.细胞计数板、

5.载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考):

(一)AO 单独染色

1.收集细胞(采用流式细胞仪检测时,应先固定细胞),用 AO Stain Buffer(1×)清洗细胞 1 次,加入适量的 AO Stain Buffer(1×)重悬细胞,计数并调节细胞浓度至 10 6/ml。

2.取适量的细胞悬液和 Ao Stain,按照细胞悬液: Ao Stain=19:1 的比例混合,轻轻混勻。如果采用荧光显微镜下 观察,一般取 95μl 细胞悬液和 5μl AO Stain 混合即可。

3.室温避光染色 15min,滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。

4.荧光显微镜下观察(激发滤光片波长 488nm,阻断滤光片波长 515nm),计数并拍照。

染色结果:

正常细胞    细胞被均匀染成黄绿色荧光

凋亡细胞    染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小与一、致密浓染的绿色颗粒

(二)AO/EB 双染色

1.收集细胞,用 Ao Stain Buffer(1×)清洗细胞 1 次,加入适量的 Ao Stain Buffer(1×)重悬细胞,计数并调节细 胞浓度至 10 6/ml。

2.取适量的细胞悬液和 Ao Stain,按照细胞悬液 Ao Stain=19:1 的比例混合,并加人适量 EB 染色液,轻轻混勻。如 果采用荧光显微镜下观察,一般取 95μl 细胞悬液和 5μl Ao Stain 混合即可。

3.室温避光染色 15min,滴加于载玻片上并加盖玻片。

4.荧光显微镜滤光片 515nm 观察,计数并拍照。

染色结果:

正常细胞    均勻染成绿色荧光

坏死细胞    细胞桔黄色荧光

调亡细胞    染色质浓缩,细胞核碎裂,被染成大小不一、致密浓染的黄绿色 颗粒或见胞质芽状突起

注意事项:

1.吖啶橙染色常与 EB 染色合用,可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

2.如有低温离心机进行离心效果更佳,同事应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:6 个月有效。

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