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RIPA裂解液(蛋白类)

简要描述:

RIPA裂解液(蛋白类)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白 样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。本产品RIPA裂解液的主要成分为50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS 等。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:368

RIPA裂解液(蛋白类)

产品货号:T16003

产品规格:100ml

保存条件:运输 4℃,*保存-20℃

产品简介:

RIPA裂解液(蛋白类)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白 样品可以 用于常规的 Western、IP 等。RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。本产品 RIPA 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS 等。

操作步骤:

1. 对于培养细胞样品:

1) 对于贴壁细胞,去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有 干扰, 可以不洗)。按照每 10 7细胞加入 200 微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞 充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。

2) 对于悬浮细胞,离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照每 10 7细胞加入 200 微升裂解液 的比例 加入裂解液。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,可 适量添加裂解液。

3) 充分裂解后,10000-14000rpm 离心 5-10 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

2. 对于组织样品:

1) 把组织剪切成细小的碎片。

2) 按照每 20 毫克组织加入 100-200 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添 加更多 的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

3) 用玻璃匀浆器冰上匀浆,直至充分裂解。

4) 充分裂解后,10000-14000rpm 离心 5-10 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和 免疫共沉淀等操作。

5) 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。 然后同样离心取上清,用于后续实验。

注意事项 :

1. 裂解得到的蛋白样品,由于含有较高浓度的去垢剂干扰,不能用 Bradford 法测定蛋白浓度,可以选用本公司 生产的 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2. 用户使用前可根据需要加入蛋白酶抑制剂如 PMSF 或者根据需要再加入 leupeptin,aprotinin 等其它抑制剂。

3. 裂解液中 SDS 4℃保存易沉淀析出,使用前应该 37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用。

4. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

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