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胞浆蛋白提取试剂盒

简要描述:

胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为温和,可获得蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。

更新时间:2021-11-29型号:厂商性质:生产厂家浏览量:105

产品名称:胞浆蛋白提取试剂盒

产品货号:26161

产品规格:50T/100T

产品简介:

胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂, 作用较为温和,可获得蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋 白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。

产品组成:

产品名称    50T       100T      保存条件  
裂解液 50ml 100ml 2-8℃
 磷酸酶抑制剂(100×) 0.5ml 1ml -20℃
 蛋白酶抑制剂(100×) 0.5ml  1ml  -20℃
 PMSF(100×) 0.5ml 1ml -20℃

操作步骤:

1. 组织胞浆蛋白的提取

1) 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;

2) 称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml 的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;

3) 将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 ℃ 12000g 离心30min;

4) 吸取上清至新的管中;

5) 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 (提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

2. 细胞胞浆蛋白的提取

1) 裂解液的用量:10 7个细胞需要裂解液1ml;

2) 贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀 进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min。

3) 悬浮细胞:4℃ 400g 离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋10s,放置冰 上裂解10min,重复3-4次;

4) 裂解完毕之后,将细胞裂解液4 ℃12000g 离心30min;

5) 将上清移入新的EP管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 (提取好的蛋白建议保存于-80℃,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)

注意事项:

1. 实验过程,所有试剂都要需要预冷或者即融,保证操作过程中的低温环境。

2. PSMF(有毒)现用现加,因为PMSF在水溶液中会快速降解。

有效期:至少一年。

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