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细胞、组织核蛋白提取试剂盒

简要描述:

细胞、组织核蛋白提取试剂盒1. 请在蛋白抽提前取出 Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 进行预冷。

2. 收集细胞于 1.5ml 离心管中,3000rpm 离心去上清。估算所收集细胞体积(Packed Cell Volume,PCV)。 以下步骤以 100μL 细胞体积为例,具体实验可根据细胞数按相应倍数放大。

更新时间:2021-11-29型号:厂商性质:生产厂家浏览量:77

产品名称:细胞、组织核蛋白提取试剂盒

产品货号:26131

操作步骤:

 产品信息  包装(50次/100 次)    储存条件   
 Hypotonic Buffer 35ml/70ml  4℃
Isotonic Buffer 35ml/70ml  4℃
 Extraction Buffer 3.5ml/7ml  室温
 DTT 溶液 0.5ml/1ml  -20℃

 

1. 请在蛋白抽提前取出 Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer、Extraction Buffer 进行预冷。

2. 收集细胞于 1.5ml 离心管中,3000rpm 离心去上清。估算所收集细胞体积(Packed Cell Volume,PCV)。 以下步骤以 100μL 细胞体积为例,具体实验可根据细胞数按相应倍数放大。

3. 每 100μL PCV 加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer(含 DTT 及蛋白酶抑制剂),用 10μL 枪 头轻轻吹匀 20-30 次,避免泡沫。

4. 冰上孵育 15min (每 5min 用 10μL 枪头轻轻吹匀 20 次),4℃2000 rpm 离心 5min。

5. 用移液器吸弃上清,于沉淀中加入 200μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制 剂)。

a.将沉淀转移至玻璃匀浆器中,冰上匀浆 5-10 次;或 b.用 1ml 注射器(5 号针头)反复吹吸沉淀溶 液 5 次。

  可选步骤:此时可去少量样品用台盼蓝染色液染色,未裂解的活细胞不会被染色,裂解后的可被染色。

6. 4℃12000-14000rpm 离心 20min。

7. 将上清转移至新 1.5ml 离心管中,此上清为细胞质蛋白,沉淀为细胞核。

8. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂),冰上孵育 30min,每隔 5min 轻 轻上下混匀 10 次。

9. 4℃ 12000-16000rpm 离心 10min。 10. 收集上清-20℃保存,此提取液即为细胞核蛋白。

提取:

1. 称取 50mg 组织,将组织块用 PBS 润洗,吸弃 PBS 并转移至匀浆器中。

2. 每 50mg 组织加 500μL Hypotonic Buffer/Isotonic Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂)。

3. 冰上匀浆 15-20 次至细胞破碎。

4. 收集匀浆液,4℃ 12000-14000rpm 离心 20min。

5. 将上清转移至新 1.5ml 离心管中,此上清为细胞质蛋白,沉淀为细胞核。

6. 于沉淀中加入 70μL Extraction Buffer (含 DTT 及蛋白酶抑制剂),冰上孵育 30min,每隔 5min 轻 轻上下混匀 10 次。

7. 4℃ 12000-16000rpm 离心 10min。

8. 收集上清-20℃保存,此提取液即为细胞核蛋白。

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