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柱式组织基因组提取试剂盒

简要描述:

柱式组织基因组提取试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物、人组织中提取高纯度总DNA。本品可纯化获得分子量大为50 kb的DNA的片段,纯化过程不需使用苯酚等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度DNA。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:78

柱式组织基因组提取试剂盒

产品货号:28105

产品规格:100 次/200 次

产品简介:

   柱式组织基因组提取试剂盒适合于从新鲜或冷冻的动物、人组织中提取高纯度总 DNA。本品可纯化获得分子量大为 50 kb 的 DNA的 片段,纯化过程不需使用苯酚等有毒溶剂,无需乙醇沉淀。试剂盒采用优化的缓冲体系使 裂解液中的 DNA 高效特异的结合到硅基质离心吸附柱上,PCR 和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤 被有效去除,后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度 DNA。纯化得到的 DNA 可以直接用于酶切、PCR、 Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

自备试剂:无水乙醇

包装清单: 

操作步骤:

1.如果提取材料为动物组织,取 25 mg(脾组织用量应少于 10 mg);如果材料为鼠尾,取一段长度为 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或两段长度为 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。

a.样本进行液氮研磨或切成小块后置于 1.5 ml 离心管中,加入 180 μl Buffer GTL,将不同样品做好标记。

b.若使用匀浆器处理样本,匀浆前向样本中加入不超过 80 μl Buffer GTL,匀浆后加入 100 μl Buffer GTL。

注意:

1)确保各组织的量不要超出*范围。

2)组织样本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用匀浆器匀浆处理,可以增加 裂解效率。

2.加入 20 μl Proteinase K,涡旋震荡使样品彻底混匀。56℃水浴,直至组织完全裂解,孵育过程中可每 隔一段时间颠倒或震荡离心管使样品分散。

注意:

1)不同组织消化时间不同,通常 1-3 小时即可完成,鼠尾需要消化 6-8 小时,必要时过夜消化,不会影响 后续操作。

2)如果孵育和涡旋震荡后仍然有胶状物质,延长 56℃孵育时间或再加入 20 μl Proteinase K 消化。

3)如需去除 RNA,可在上述步骤完成后,加入 4μl 的浓度为 100 mg/ml 的 RNase A 溶液,涡旋 15 秒,室 温放置 5-10 分钟。 3.加入 200 μl Buffer GL,涡旋震荡充分混匀,70℃水浴 10 分钟。短暂离心后加入 200 μl 无水乙醇, 涡旋震荡充分混匀。

注意:

1)加入 Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。

2)加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续实验。一些组织(如脾,肺)在加入 Buffer GL 和无水乙醇后可能形成溶胶状产物,此时*进行剧烈震荡或涡旋处理。

4.柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS, 12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

5.将步骤 3 所得溶液短暂离心,全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,若一次不能加完 溶液,可分多次转入。12000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6.向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm 离心 1 分钟, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

注意:如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分 钟再离心。

7.重复步骤 6。

8.12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液。

注意:

这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

9.将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加 50μl Buffer EB,室温 放置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意:

1)洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)。

2)为了提高基因组提取量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟。

3)洗脱体积不应小于 30μl,体积过少会影响回收效率。

注意事项 :

1.*使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇(Buffer PW 100 次包装 18ml,使 用前加入 72ml 无水乙醇;Buffer PW 200 次包装 18ml,使用前加入 144ml 无水乙醇);

2.所有离心步骤均可室温下进行。

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