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细菌基因组提取试剂盒

简要描述:

本试剂盒细菌基因组提取试剂盒吸附柱至多可吸附10μg的DNA,同时大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化提取的基因组纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

更新时间:2021-07-26型号:厂商性质:生产厂家浏览量:94

产品货号:27102

产品规格:50 次/100 次

产品简介:

细菌基因组提取试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过快速简单的结合-洗涤-洗脱三步即可从细菌中提取基 因组,每个吸附柱至多可吸附 10μg 的 DNA,同时大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等杂质。纯化提取的 基因组纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、体外转录等分子生物学实验。

 

包装清单:

自备试剂:无水乙醇。

 

操作步骤:

1. 收集适量细菌于 1.5ml 离心管中,8000rpm 离心 5min,吸弃上清。加入 400μl Re-Suspension Buffer 将 菌体重悬。

2. 8000rpm 离心 5min,吸弃上清留沉淀。加入 600μLLysis Buffer,用移液器轻轻吹匀后于 60℃孵育 5min。

3. 室温静置 5min,加入 RNase A 2μl,上下颠倒混匀 3 次,37℃孵育 20min。

4. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

5. 将步骤 3 或 4 所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟,倒 掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm 离心 1 分钟, 倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

7. 注意:如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分钟再离心。

8. 重复步骤 6。

9. 12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液。

10. 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

11. 将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加 50μlBuffer EB,室温放 置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

 

注意:

(1)洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)。

(2)为了提高基因组的提取量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置 2 分钟,13,000 rpm 离心 1 分钟。

(3)洗脱体积不应小于 30μl,体积过少会影响回收效率。

 

注意事项:

1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。

2. 所有离心步骤均可室温下进行。

 

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