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SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

简要描述:

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包括SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备纯水,即可制备高质量各种浓度的变性PAGE凝胶,方便、快捷。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:173

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

产品编号: P10312

产品规格:100-150 次

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒产品内容:   

      SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒所提供的 APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入超纯水溶解即配制成 10%APS 溶液(1.5 g APS 加 15 ml 纯水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃ 保存一个月。

产品简介:

      SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒包括 SDS-PAGE 凝胶制备所需全套试剂,只需自备纯水,即可制备高质量各种浓度的变性 PAGE 凝胶,方 便、快捷。

注意事项:

1. 10%APS 配制后分装-20℃保存。APS 溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防 失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20 度保存的 10%APS。

2. PAGE 凝胶的凝聚速度与温度以及 APS、TEMED 的用量密切相关;在其它条件不变的情况下,可通过改变 APSTEMED 的用量,控制 PAGE 凝胶的聚合速度,凝胶聚合过快不利于操作;附表中的 APS 及 TEMED 量可 供参考,应根据实操作情况做适当的调整。

3. 在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。

4. 在分离胶上层加纯水时要小心操作,加水时速度不能太快。

5. 丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

6. 本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤:

  根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度,适用胶浓度请参考附表 II 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表 3)

1. 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。  注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加 入上层筛板可根据实际情况选择。

2. 将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Separating Gel Buffer、SDS Buffer 和纯水在小烧杯或试管中混合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4. 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于 mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端 1.5 cm 或距梳齿约 0.5 cm 即 可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层 1 cm 的水层,使凝胶表面保持平整。

5. 静置 30-60 分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。

II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表 2)

1. 去除覆盖在分离胶上的水层。

2. 将不同体积的 30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer、SDS Buffer 和纯水在一个小烧杯或试管中混 合。

3. 加入 10%APS 和 TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。

4. 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5. 将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。

6. 静置 10~20 分钟,等待浓缩胶聚合。

7. 待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。

8. 进行常规电泳操作。

附表 1. SDS-PAGE 分离胶的浓度与适用待测蛋白检测范围

SDS-PAGE分离胶浓度 适用待测蛋白检测范围
8%胶30-200kD
10%胶20-130kD
12%胶12-80 kD

     

附表 2. 配制 5%SDS-PAGE 浓缩胶

附表 3. 配制 SDS-PAGE 分离胶 

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