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琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

简要描述:

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合DNA-洗涤-洗脱步骤即可从普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化70 bp-30 kb的DNA的片段,溶胶速度快,回收率高。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:150

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒

产品货号:27101

产品规格:200 次

产品简介:

       琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒采用新型硅基质膜技术和试剂配方,通过独特的离心吸附柱快速的结合 DNA-洗涤-洗脱步骤即可从 普通或低熔点琼脂糖凝胶中回收纯化 70 bp-30 kb 的 DNA 的片段,溶胶速度快,回收率高。溶胶液中含有 pH 指示 剂,可根据颜色来判断溶胶回收是否达到适用状态。每个吸附柱可吸附高达 10μg 的 DNA,同时有效去除引物、 酶、矿物油、琼脂糖等杂质。纯化回收的 DNA 纯度及浓度高,完整性好,可直接用于测序、连接和转化、标记、 体外转录等分子生物学实验。

产品内容:

      

自备试剂:

  使用前 Buffer PW 50 次加入 36ml 无水乙醇/100 次加入 72ml 无水乙醇/200 次加入 144ml 无水乙醇。

操作步骤:

1. 将单一目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下(尽量切除多余部分),放入干净的离心管(自备)中,称量计 算凝胶重量(提前记录离心管重量)。

2. 注意:若胶块的体积过大,可将胶块切成碎块。

3. 向胶块中加入 2 倍体积 Buffer PG(如凝胶重为 100 mg,其体积可视为 200μl,依此类推)。

4. 57℃水浴温育,其间每隔 2-3 分钟温和地上下颠倒离心管,待溶胶液为黄色,以确保胶块充分溶解。如果还 有未溶的胶块,可再补加一些溶胶液或继续放置几分钟直至胶块完全溶解。

5. (可选步骤)当回收片段<300 bp 时,应加入 1/2 胶体积的异丙醇,上下颠倒混匀(如凝胶重 100 mg,则加 入 50μl 的异丙醇)。

6. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7. 将步骤 3 或 4 所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收 集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

8. 注意:吸附柱容积为 750μl,若样品体积大于 750μl 可分批加入。

9. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收 集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

10. 注意:如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分钟再离心。

11. 重复步骤 7。

12. 12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液。

13. 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

14. 将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加 50μl Buffer EB,室温放置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意:

1. 为了提高 DNA 的回收量,可将离心得到的溶液重新滴加到吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟。

2. 洗脱体积不应小于 30μl,体积过少会影响回收效率。

3. 回收大于 10 kb 的 DNA的 片段时,Buffer EB 应在 57℃水浴中预热,可增加回收效率。

备注:

     琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒也适用于 PCR 产物的纯化回收。在 PCR 反应液中加入等体积的 Buffer PG,充分混匀(对于回收小 于 150bp 的小片段可将溶液的体积增加到 3 倍以提高回收率)接上述步骤 5 进行后续操作。

注意事项:

1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。

2. 使用前请检查 Buffer PG,如果出现结晶或者沉淀,可在 37℃水浴中放置 3-5 分钟,即可恢复澄清。

3. 电泳时建议使用新的电泳缓冲液,避免影响电泳和回收效果;如下一步实验要求较高,请尽量使用 TAE 电 泳缓冲液。

4. 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 DNA 造成损伤。

5. 回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关,初始量越少,洗脱体积越少,回收率越低。

6. 将水浴锅预热至 57℃。

7. 所有离心步骤均可室温下进行。

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