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离心柱式血液基因组提取试剂盒

简要描述:

离心柱式血液基因组提取试剂盒采用高盐法提取血液中的基因组DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA的片段大,纯度高,质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

更新时间:2021-01-15型号:厂商性质:生产厂家浏览量:53

离心柱式血液基因组提取试剂盒

产品货号:28103

产品规格:50 次/100 次/200 次

产品简介:

       离心柱式血液基因组提取试剂盒采用高盐法提取血液中的基因组 DNA,可大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取 的基因组 DNA 的片段大,纯度高,质量稳定可靠。

  使用离心柱式血液基因组回收的 DNA 可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 自备试剂:无水乙醇。使用前 Buffer PW50 次加入 39ml 无水乙醇/100 次加入 77ml 无水乙醇/200 次加入 144ml 无水乙醇

包装清单:   

操作步骤:

以下步骤以提取 2mL 血液中基因组为例,具体实验可根据血液量等比例减少。

1. 于离心管中加入 2mLBuffer A 和 2mL 预冷的超纯水。上下颠倒 6-8 次,冰上孵育 2-3min。

2. 3500rpm 离心 15min,弃上清。

3. 加入 150μl Buffer B,剧烈涡旋 30-60s 至沉淀重新散裂,加入 5μl Proteinase K 溶液,充分颠倒混匀,56℃放 置 10 min,其间颠倒混匀数次,溶液应变清亮(如溶液未彻底变清亮,请延长裂解时间至溶液清亮为止)。

注意:加入缓冲液 Buffer B 时可能会产生白色沉淀,一般 37℃放置时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变 清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯,需等比例补加 Buffer B 及 Proteinase K。当血液体积≤200μl 且没有采用红细胞裂解处理,或是样本储存条件不佳,水浴后颜色可能为深褐色,注意溶 液中没有团块等沉淀。

4. 加入 3 倍体积的 Buffer PG(约 0.45mL),涡旋充分混匀。

5. 柱平衡:向已装入收集管(Collection Tubes)中的吸附柱(Spin Columns)中加入 200μl Buffer PS,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

6. 将步骤 3 所得溶液加入到已装入收集管的吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管 中的废液,将吸附柱放回收集管中(如步骤 3 所得溶液体积过大,可分次加入吸附柱中,12000 rpm 离心 1 分钟,弃流穿液)。

7. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

注意:如果纯化的 DNA 用于盐敏感的实验(例如平末端连接或直接测序),建议加入 Buffer PW 静置 2-5 分钟 再离心。

8. 重复步骤 6。

9. 12000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中的废液。 注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。

10. 将吸附柱放到一个新的 1.5 ml 离心管(自备)中,向吸附膜中间位置悬空滴加 50μlBuffer EB,室温放置 2 分钟。12000 rpm 离心 1 分钟,收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意:

1) 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液,应保证其 pH 值在 7.0-8.5 之间(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)。

2) 为了提高基因组提取量,可将离心得到的溶液重新加到吸附柱中,室温放置 2 分钟,12000 rpm 离心 1 分钟。

3) 洗脱体积不应小于 30μl,体积过少会影响回收效率。

注意事项:

1. *使用前应按照试剂瓶标签的说明在 Buffer PW 中加入无水乙醇。

2. 若 Buffer B 中有沉淀,可在 37℃水浴中重新溶解,摇匀后使用。

3. 所有离心步骤均可室温下进行。

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