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使用杆粒提取试剂盒时这些事情需注意了!

发布时间:2021-12-14   点击次数:257次
  杆粒提取试剂盒使用时不纯化的杆粒DNA存在-20℃,因为反复冻融会剪切DNA。分析重组杆粒DNA(PCR鉴定重组杆粒DNA)或转染昆虫细胞。它适用于大量从DH10Bac转化株提取重组杆粒pFastBac。纯化后的杆粒DNA使用PCR检验或者进行转染。
 

杆粒提取试剂盒

 

  杆粒提取试剂盒操作步骤:
  1、5ml离心管12000rpm离心1min收集细胞。
  2、真空吸干上清,0.3ml的Solution1重悬沉淀,轻轻地震荡或上下混匀。
  3、0.3ml的Solution2轻轻混匀,室温孵育5min。注意:悬浮的沉淀应该从浑浊到几乎半透明。
  4、缓慢加入0.3mlKAC,加入过程中轻轻混匀,冰上放置5-10min。
  5、12000rpm离心10min。
  6、轻轻将上清转移到含有0.8ml异丙醇的离心管,不要吸到白色沉淀,颠倒混匀,冰上孵育5-10min。
  7、室温12000rpm离心15min。
  8、小心弃去上清,不要浮起沉淀,加入0.5mlWashBuffer,颠倒离心管数次清洗沉淀。
  9、室温12000rpm离心5min。重复8和9。
  10、轻轻吸弃上清,室温5-10min干燥沉淀,不要过分干燥。注意:勿使用真空离心选装蒸发仪去干燥DNA。
  11、40μlEndSolution重新溶解DNA沉淀,为避免剪切,勿机械重悬DNA,让溶液顺管子轻轻流下溶解DNA。
 
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